(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111429090.2 (22)申请日 2021.11.29 (71)申请人 华东师范大学 地址 200062 上海市普陀区中山北路3 663 号 申请人 上海优卡迪生物医药 科技有限公司 (72)发明人 方小燕　徐南　康立清　俞磊　 谭靖雯　叶晶　贾裕杰　 (74)专利代理 机构 上海市汇业 律师事务所 31325 代理人 王函 (51)Int.Cl. C12N 5/0783(2010.01) A61K 35/17(2015.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种高纯度CD56+γδT细胞及其制备方法 和用途 (57)摘要 本发明提供一种高纯度CD56+γδT细胞， 一 种高效诱导和大量扩增CD56+γδT细胞的培养 方法， 和将CD56+γδT细胞用于治疗肺癌、 胃癌、 胰腺癌和膀胱癌等癌症的用途。 所培养的CD56+ γδT细胞增殖能力强， 杀瘤能力强， 可以较好地 解决γδT细胞来源问题， 并有应用于临床的前 景。 权利要求书1页 说明书5页 附图4页 CN 114107200 A 2022.03.01 CN 114107200 A 1.一种高纯度CD56+γδT细胞， 其特征在于， γδT细胞占细胞总数的90％以上， CD56高 表达的CD5 6+γ δT细胞占γ δT细胞总数的75％以上。 2.根据权利要求1所述的高纯度CD5 6+γ δT细胞在制备肿瘤治疗剂中的用途。 3.根据权利要求2所述的用途， 其特 征在于， 所述肿瘤为肺癌、 胃癌、 胰腺癌或膀胱癌。 4.一种用于治疗肿瘤的制剂， 其特征在于， 包括权利要求1或2所述的高纯度CD56+γδT 细胞。 5.根据权利要求 4所述的制剂， 其特 征在于， 所述肿瘤为肺癌、 胃癌、 胰腺癌或膀胱癌。 6.一种培养基， 其特征在于， 在含5％FBS的T009培养基的基础上， 还包括如下成分： 10 ～200ng/ml IL15和10～10 00ng/ml pVC(L‑抗坏血酸 ‑2‑磷酸盐)。 7.根据权利要求6所述的培养基， 其特征在于， 还包括下列三种额外成分中的任一种； (1)10～200ng/ml  IL21； (2)10～200ng/ml  IL21和100～1000IU  IL2； (3)10～200ng/mlIL4 和100～1000IU IL2。 8.一种制备权利要求1所述的高纯度CD56+γδT细胞的方法， 其特征在于， 包括以下步 骤： (1)从血液中利用淋巴细胞分离液制备PBM C； (2)使用分选抗体和磁珠， 从PBM C中制备纯度90％以上的γ δT细胞； (3)诱导和扩增： 将步骤(2)得到的γδT细胞， 加入权利要求6或7所述的培养基， 放入二 氧化碳培养箱37℃， 5％CO2培养2‑3周。 9.根据权利要求8所述的方法， 其特 征在于， 使用的分选抗体为γ δTCR抗体。 10.根据权利 要求8‑9任一项所述的方法， 其特征在于， 每隔1 ‑3天计数， 补液， 控制细胞 浓度在5*105～5*106个/ml。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114107200 A 2一种高纯度C D56+γ δT细胞及其制备方 法和用途 技术领域 [0001]本发明涉及免疫治疗领域， 具体涉及一种高纯度CD56+γδT细胞、 高效诱导和扩增 所述高纯度CD56+γδT的培养基和培养方法、 以及所述高纯度CD 56+γδT细胞治疗肿瘤的用 途。 背景技术 [0002]免疫系统对癌症的先天和获得性免疫可以在称为癌症免疫监视的过程中识别和 破坏新生的肿瘤细胞。 正常细胞受致癌物和其他遗传毒性损害以及内在的肿瘤抑制机制 (例如p53， ATM， Ras)失效而转化为肿瘤细胞。 这些肿瘤细胞表达应激诱导的分子， 例如表面 钙网蛋白， MHC  I类分子的肿瘤抗原， NKG2D配体等， 它们可分别被免疫细胞识别。 T淋巴细胞 是免疫系统的重要组成部分， 根据T细胞表 面受体(TCR)不同， T淋巴细胞可以分为α β T和γδ T。 α β T主要参与获得性免疫， γδT主要参与先天性免疫。 目前主要的CART产品以α β T为主， 将 抗原抗体的高亲和性和T淋巴细胞的杀伤作用相结合， 通过构建特异 性嵌合抗原受体， 经基 因转导使T淋巴细胞表达这种嵌合抗原受体， 特异性地识别靶抗原从而杀伤靶细胞。 与α β T 细胞相比， γ δT具有以下优势， 有望成为 通用CART的候选药物。 [0003]1.大多数癌细胞除了具有抗原和信号外， 还能分泌一种叫做IPP(异戊烯焦磷酸) 的物质。 目前， 在免疫细胞中， 只发现γδT细胞具有这种识别IPP的功能， 在激活和增殖细胞 后可攻击癌细胞。 [0004]2.γδT细胞肿瘤浸润性强， 研究发现TIL中γδT数量丰富， 已在多种类型的癌症 (包括结直肠癌， 乳 腺癌， 前列腺癌， 卵巢癌和肾细胞癌)中分离得到γδT细胞性质的TIL。 在 常规药物难以进入的肿瘤， 例如胰腺癌中， γ δT， 浸润性是影响疗效的主 要因素之一。 [0005]3.γδT作为先天免疫细胞， 反应比α β T细胞更快， 在没有CAR的情况下， 对肿瘤细胞 也能具有杀伤 能力， 因此不受常规的突变影响， 还可以绕过最常见 的癌症免疫逃逸机制之 一——表面MHC I类分子的下调。 [0006]4. α β T识别抗原需要依赖HLA分子的提呈， 不同个体HLA系统具有特异性， 除非供者 和受体的HLA分子精确匹配， 否则 供者α β T将与受体发生免疫排斥反应。 而γδT细胞识别抗 原不依赖HLA分子的提呈， 不会将患者的身体识别为外来物， 因此不会引起GvHD(移植物抗 宿主病)。 [0007]5.γδT细胞对普通细胞更安全， 尚没有与γδT细胞疗法相关的严重的不良反应的 报道， 而α β T会有 “脱靶”现象， 产生 不良反应。 [0008]CD56是一种神 经细胞粘附分子， 通常被认为是自然杀伤细胞(NK)的表型标志物， NK细胞通常定义为CD3 ‑CD56+， 而CD3+/CD56+细胞通常被命名为NKT或NKT样细胞， 常见的 NKT多为α β T。 到目前为止， CD56细胞的表达对淋巴细胞的功能尚不够清楚， 可能与淋巴细胞 与靶细胞之间的粘附有关。 CD5 6+γ δT细胞表现出来的优点包括： [0009]1、 杀伤肿瘤 细胞能力更强。 [0010]2、 主要以穿孔素颗粒酶途径杀伤靶细胞， 速度快。说　明　书 1/5 页 3 CN 114107200 A 3