(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111570812.6 (22)申请日 2021.12.21 (71)申请人 湖南省人民医院 （湖南师 范大学附 属第一医院） 地址 410000 湖南省长 沙市解放西路61号 (72)发明人 陈佳　李龙　吴志颖　张跃玟　 (74)专利代理 机构 长沙伊柏专利代理事务所 (普通合伙) 4326 5 代理人 罗莎 (51)Int.Cl. A61K 9/51(2006.01) A61K 47/36(2006.01) A61K 47/12(2006.01) A61K 47/02(2006.01) A61K 31/352(2006.01)A61K 48/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) B82Y 5/00(2011.01) B82Y 40/00(2011.01) (54)发明名称 一种高效递送siRNA的载药纳米粒及其制备 方法与应用 (57)摘要 本发明提供了一种高效递送siRNA的载药纳 米粒及其制备方法与应用， 该siRNA载药纳米粒 由Zn2+、 槲皮素、 siRNA和苯硼酸 ‑透明质酸共轭 物通过自组装形成， Zn2+与槲皮素络合后包载 siRNA形成载药内核， 再由苯硼酸 ‑透明质酸共轭 物包裹载药内核组装成高效递送siRNA的载药纳 米粒。 本发明的载药纳米粒通过Zn2+与槲皮素及 siRNA的配位络合作用形成一种新型 “以药载药 ” 内核， 并以苯硼酸基团修饰的HA作为外壳， 构建 双重酸敏感型联合载药纳米粒， 可以实现靶向 SIRT1的基因药物和小分子 药物的共递送和协同 治疗； 同时该载药纳米粒包含磷酸锌配位键和苯 硼酸酯键双重酸敏官能 团， 在胞内溶酶体酸性环 境中迅速断裂， 使载体有效解散， 并诱发溶酶体 内渗透压升高以促进药物的高效递送与释放。 权利要求书1页 说明书7页 附图5页 CN 114224869 A 2022.03.25 CN 114224869 A 1.一种高效递送siRNA的载药纳米粒， 其特征在于， 所述siRNA载药纳米粒 由Zn2+、 槲皮 素、 siRNA和苯硼酸 ‑透明质酸共轭物通过自组装形成， 所述Zn2+与槲皮素络合后包载siRNA 形成载药内核， 所述苯硼酸 ‑透明质酸共轭物包裹载药内核组装成 高效递送si RNA的载药纳 米粒。 2.根据权利要求1所述 高效递送siRNA的载药纳米粒， 其特征在于， 所述siRNA为干扰去 乙酰化酶基因表达的基因片段。 3.一种如权利要求1所述高效递送siRNA的载药纳米粒的制备方法， 其特征在于， 包括 以下步骤： S1、 将槲皮素与无水乙醇混合， 加热搅拌溶解后加入Na2CO3， 继续搅拌1～2h， 最后加入 锕化锌,经 过搅拌、 抽滤、 无 水乙醇洗涤后再抽滤， 得到槲皮素与Zn2+的络合物； S2、 在透明质酸水溶液中加入碳二亚胺和N ‑羟基琥珀酰亚胺， 调节pH4～5活化0.5～ 1h， 再加入4 ‑氨甲基苯硼酸密闭反应2 4～36h， 透析除杂后收集固体， 冷冻干燥得到苯硼酸 ‑ 透明质酸共 轭物； S3、 将步骤S1制备的槲皮素与Zn2+的络合物和siRNA混合， 弱碱性环境恒温孵育1～2h， 随后滴加步骤S2制备得到的苯硼酸 ‑透明质酸共轭物， 最后滴加缓冲液， 恒温孵育1～2h后 过滤干燥得到高效递送siRNA的载 药纳米粒。 4.根据权利要求3所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤S1中槲皮素、 Na2CO3和锕化锌 的摩尔比为1:2:2 ～4。 5.根据权利 要求3所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤S2中透明质酸、 碳二亚胺、 N ‑ 羟基琥珀酰 亚胺和4‑氨甲基苯硼酸的摩尔比为1:1～ 2:1～2:1～2。 6.根据权利要求3所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤S2中透明质酸的分子量为48 ～780kDa。 7.根据权利要求3所述的制备方法， 其特征在于， 所述槲皮素与Zn2+的络合物、 siRNA和 苯硼酸‑透明质酸共 轭物的摩尔比为20:1～ 2:2～4。 8.根据权利 要求3所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤S3中恒温孵育温度为35～40 ℃。 9.根据权利要求3所述的制备 方法， 其特 征在于， 所述 步骤S3中缓冲液为H EPES缓冲液。 10.一种如权利要求1～2任一项所述的高效递送siRNA的载药纳米粒或如权利要求3～ 9任一项所述的制备方法得到的高效递送siRNA的载药纳米粒在制备膀胱癌的基因共载药 物中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114224869 A 2一种高效递送siRNA的载药纳米粒 及其制备方 法与应用 技术领域 [0001]本发明涉及纳米材料和纳米生物医药领域， 具体涉及一种高效递送siRNA的载药 纳米粒及其制备 方法与应用。 背景技术 [0002]膀胱癌是常见的肿瘤恶性。 据2018年美国癌症统计数据显示， 仅在美国其新发病 例大约7.7万， 且发病率呈上升趋势。 膀胱癌高昂的治疗费用及其高死亡率已成为全球严重 的社会问题。 辅助化疗可以降低癌症复发率， 预防或延缓癌症的进展， 然而， 常规的化疗手 段缺乏靶向性， 所产生的严重的毒副作用极大的降低了患者顺应性和生存质量； 相比而言， 联合用药可降低明显降低单一药物的给药剂量， 减少毒副作用的发生， 已成为抗肿瘤化疗 的研究热点。 [0003]我们研究发现， Sirtuin  1(去乙酰化酶1,SIRT1)在膀胱癌细胞中过表达， Sirtuin   1与葡萄糖转运关键蛋白GLUT1表达正向相关， 且Sirtuin  1的过表达可促进GLUT1蛋白的表 达， 进一步诱导肿瘤的糖代谢 活跃而促肿瘤增殖； 与之相反， SIRT1抑制剂则可降低GLUT1的 表达， 进而降低肿瘤细胞的糖摄取， 诱导细胞凋亡。 为此， 我们创新性地提出SI RT1与肿瘤相 互作用的新机制， 即通过干扰GLUT1表达， 实现对肿 瘤的调控。 基因药物是分子靶向治疗研 究的一个重要方向， 其可在基因水平抑制相关蛋白的表达， 从而实现靶点的沉默 效应。 与传 统化疗药物相比， 基因药物可特异性抑制肿 瘤而无明显毒副反应， 然而， siRNA在体内稳定 性、 靶向性及 细胞摄能力差， 其在体内的输送需依赖递送载体。 [0004]槲皮素(Quercetin)是从豆科植物有效成分芦丁中提取的疏水性黄酮类化合物， 属于酪氨酸激酶抑制剂(RTKs  inhibitors)。 研究表明， 槲皮素可通过表皮生长因子受体 (EGFR)介导的机制抑制基质金属蛋白酶9(MMP9)的分泌， 从而限制肿瘤细胞的侵袭能力， 抑 制Twist基因表达从而诱 导肿瘤细胞凋亡， 显著抑制癌细胞的增殖， [0005]专利CN112353950A公开了一种 “以药载药 ”的siRNA纳米递送系统， 利用槲皮素与 siRNA通过π ‑π键、 亲疏水作用和氢键作用自组装 形成纳米药物， 以期实现槲皮素与siRNA协 同作用于肿瘤细胞， 但是所述siRNA纳米递送系统存在明显缺陷： 1)仅通过槲皮素包载 siRNA的稳定性不高， 在人体转运过程中容易裂解， 递送效率不高； 2)槲皮素与siRNA形成的 纳米系统在被细胞摄入后， 细胞中的溶酶体能够清除外源性大分子物质， 同时溶酶体中富 含的核酸酶对于进入细胞内的siRNA具有高效消化分解作用， 会导致该纳米递送系统难以 突破细胞自身的防御属性， 也就难以进一步作用于抑制肿瘤细胞； 3)该纳米递送系统不具 有肿瘤靶向功能， 不能实现对于肿瘤 细胞的靶向作用。 发明内容 [0006]为解决上述技术问题， 本发明提出了一种高效递送siRNA的载药纳米粒及其制备 方法与应用， 其目的是构建一种高效递送siRNA的纳米粒子， 既可以在人体中实现稳定转 运， 又能靶向目标肿瘤细胞， 并且还可以突破细胞的溶酶体防御体系， 最 终实现对于肿瘤细说　明　书 1/7 页 3 CN 114224869 A 3