(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111500517.3 (22)申请日 2021.12.09 (71)申请人 浙江大学杭州国际科创中心 地址 311200 浙江省杭州市萧 山区市心北 路99号5楼 (72)发明人 陈枢青　王洪亮　 (74)专利代理 机构 杭州裕阳联合专利代理有限 公司 33289 代理人 金方玮 (51)Int.Cl. A61K 39/385(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61K 39/39(2006.01) A61P 35/00(2006.01) B82Y 5/00(2011.01)B82Y 30/00(2011.01) B82Y 40/00(2011.01) (54)发明名称 一种高分子偶联多肽纳米疫苗及其制备方 法 (57)摘要 本发明公开了一种高分子偶联多肽纳米疫 苗及其制备方法， 疫苗按照 摩尔比包括： 1具有多 反应中心的高分子骨架： 8.1接枝分子： 49167 ‑ 213900有机溶剂： 170 ‑657有机碱； 本发明可以通 过调控多肽与Pam佐剂分子的化学计量比而控制 纳米疫苗的颗粒尺寸大小； 本发 明得到的多肽纳 米疫苗具有稳定的结构， 几乎不受浓度影响， 没 有浓度限制条件， 且具有 稳固共运输佐剂分子的 能力。 权利要求书2页 说明书7页 附图5页 CN 114246943 A 2022.03.29 CN 114246943 A 1.一种高分子偶联多肽纳米疫苗， 其特征在于， 按照摩尔比包括： 1具有多反应中心 的 高分子骨架： 8.1接枝分子： 49167 ‑213900有机溶剂： 170 ‑657有机碱； 所述接枝分子为共价偶联到高分子骨架上的有机分子， 包括： 末端含有半胱氨酸的抗 原多肽、 末端含有半胱氨酸的佐剂分子； 所述佐剂分子为可增强机体对该抗原的免疫应答 能力或改变免疫应答类型的辅助物质； 所述具有多反应中心的高分子骨架包括： 8 ‑Arm PEG‑Acrylate(Acr ylate修饰)、 8 ‑Arm  PEG‑Mal(Maleimide修饰)、 8 ‑Arm PEG‑OPSS(Orthopyridyl  Disulfide修饰)、 8 ‑Arm PEG‑ VS(Vinylsulfone修饰)、 8 ‑Arm PEG‑Epoxide(Epox ide修饰)、 8 ‑Arm PEG‑Alkyne(alkyne修 饰)。 2.根据权利要求1所述的一种高分子偶联多肽纳米疫苗， 其特征在于， 所述抗原多肽包 括： C16‑NLVPMVATVKKQYIKANSK FIGITELC， SEQ  NO 01； NLVPMVATVKKQYIKANSK FIGITELC， SEQ  NO 02； C16‑NLVPMVATVKKQYIKANSK FIGITELK KK， SEQ NO 03。 3.根据权利要求1所述的一种高分子偶联多肽纳米疫苗， 其特征在于， 所述佐剂分子为 Pam2CysSerLysLysLysLys ‑Cys、 Pam2CysSer ‑Cys、 Pam3CysSer ‑Cys、 Pam3CysSerLysLysLysLys ‑Cys中的一种。 4.根据权利要求1所述的一种高分子偶联多肽纳米疫苗， 其特征在于， 所述有机溶剂包 括： 二甲基亚砜、 N ‑甲基吡咯烷酮、 N,N ‑二甲基甲酰胺或N,N ‑二甲基乙酰胺中的一种或多 种。 5.根据权利要求1所述的一种高分子偶联多肽纳米疫苗， 其特征在于， 所述有机碱包 括： 乙醇胺、 甲胺、 尿素、 二甲胺、 乙二胺、 三甲基胺、 三乙胺、 丙胺、 异丙胺、 1,3 ‑丙二胺、 1,2 ‑ 丙二胺、 三丙胺、 丁胺、 异丁胺、 叔 丁胺中的一种或多种。 6.根据权利要求1所述的一种高分子偶联多肽纳米疫苗， 其特征在于， 所述抗原多肽与 佐剂分子的投料摩尔比， 影响高分子偶联多肽 纳米疫苗的颗粒尺寸。 7.根据权利要求1所述的一种高分子偶联多肽纳米疫苗， 其特征在于， 使用带有C16疏 水片段修饰的抗原多肽得到的高分子偶联多肽纳米疫苗的颗粒尺寸大于使用不带有C16疏 水片段修饰的抗原多肽得到的高分子偶联多肽 纳米疫苗的颗粒尺寸。 8.一种高分子偶联多肽 纳米疫苗的制备 方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 步骤一， 按照摩尔比： 1具有多反应中心的高分子骨架： 8.1接枝分子： 49167 ‑213900有 机溶剂： 170 ‑657有机碱准备材料； 将具有多反应中心的高分子骨架、 接枝分子溶解于有机 溶剂中； 所述接枝分子为共价偶联到高分子骨架上的有机分子， 包括： 末端含有半胱氨酸的抗 原多肽、 末端含有半胱氨酸的佐剂分子； 所述佐剂分子为可增强机体对该抗原的免疫应答 能力或改变免疫应答类型的辅助物质； 所述具有多反应中心的高分子骨架包括： 8 ‑Arm PEG‑Acrylate(Acr ylate修饰)、 8 ‑Arm  PEG‑Mal(Maleimide修饰)、 8 ‑Arm PEG‑OPSS(Orthopyridyl  Disulfide修饰)、 8 ‑Arm PEG‑ VS(Vinylsulfone修饰)、 8 ‑Arm PEG‑Epoxide(Epox ide修饰)、 8 ‑Arm PEG‑Alkyne(alkyne修 饰)；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114246943 A 2步骤二， 加入有机 碱， 搅拌后室温下避光反应； 步骤三， 加入 浓度为10 0mM的半胱氨酸淬灭反应； 步骤四， 透析 纯化， 得到高分子多肽偶联纳米疫苗样品。 9.根据权利要求8所述的一种高分子偶联多肽纳米疫苗的制备方法， 其特征在于， 所述 步骤二中的反应时间为 4‑8h。 10.根据权利要求8所述的一种高分子偶联多肽纳米疫苗的制备方法， 其特征在于， 所 述步骤四中的透析纯化的具体步骤为： 将步骤三得到的反应混合液用截留分子量为 10000Da的透析袋进行透析， 去除未反应物质， 每4小时换20 0ml水， 共计透析16小时。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114246943 A 3