(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202110835893.1 (22)申请日 2021.07.23 (66)本国优先权数据 202010721371.4 2020.07.24 CN (71)申请人 迈威 （上海） 生物科技股份有限公司 地址 201210 上海市浦东 新区李冰路576号 （创想园） 3号楼4楼 (72)发明人 张锦超　王双　焦莎莎　张畅　 王荣娟　曾大地　 (51)Int.Cl. C07K 14/71(2006.01) C07K 19/00(2006.01) C12N 15/12(2006.01) C12N 15/62(2006.01) A61K 38/17(2006.01)A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 37/02(2006.01) A61P 31/00(2006.01) (54)发明名称 TGF-β RI I突变体及其融合蛋白 (57)摘要 本发明针对TGF ‑βRII及其融合蛋白重组表 达过程中易发生降解、 断裂的技术问题， 提供一 种TGF‑βRII突变体及其融合蛋白， 所述TGF ‑β RII突变体与SEQ  ID NO:6所述野 生型TGF‑βRII 胞外区相比， 在选自第6位Gln、 第12位Asp、 第20 位Gly处存在突变。 TGF ‑βRII突变体能够结合 TGF‑β。 与野生型TGF ‑βRII相比， 所述TGF ‑β RII突变体在重组表达时具有更少的断裂和/或 降解。 便于 大规模生产、 质量更稳定的抗体/TGF ‑ βRII双功能蛋白。 权利要求书3页 说明书16页 序列表30页 附图13页 CN 113968903 A 2022.01.25 CN 113968903 A 1.一种TGF ‑β RII突变体， 其特征在于与野生型TGF ‑β RII相比， 所述TGF ‑β RII突变体在 一个或多个选自由以下位点所组成的组中的氨基酸残基位点处存在突变： 第6位、 第12位、 第20位； 其中， 所述野生型TGF ‑β RII的氨基酸残基编码顺序根据SEQ  ID NO:6确定 。 2.如权利要求1所述TGF ‑β RII突变体， 其特征在于所述突变体相对于野生型TGF ‑β RII 具有选自下组中的一种或几种突变： Q6N， D12T， G20T。 3.如权利要求1所述TGF ‑β RII突变体， 其特征在于其能够结合TGF ‑β， 所述TGF ‑β包括 TGF‑β 1、 TGF‑β 2、 TGF‑β 3。 4.如权利要求1所述TGF ‑β RII突变体， 其特征在于与野生型TGF ‑β RII相比， 所述TGF ‑β RII突变体在重组表达时具有更少的断裂和/或降解。 5.一种融合蛋白， 其包括两个或更多个功能片段， 其中至少一个功能片段具有权利要 求1‑4任一所述TGF ‑β RII突变体的氨基酸序列。 6.如权利要求5所述的融合蛋白， 其特征在于所述两个或更多个功能片段各自独立的 发挥功能； 可选的， 各功能片段之间通过多肽接 头(Linker)连接 。 7.如权利要求5 ‑6任一所述融合蛋白， 其特征在于所述功能片段还包括抗体或其抗原 结合部分、 受体或其配体结合部分、 细胞因子或其片段、 细胞毒素或其变体、 标记物或示踪 物等。 8.如权利要求5 ‑6任一所述融合蛋白， 其特征在于所述功能片段特异性结合选自以下 组中的靶点： 肿瘤或癌症免疫治疗靶点、 慢性 感染性疾病免疫治疗靶点、 自身免疫性疾病治 疗靶点。 9.如权利要求8所述融合蛋白， 其特征在于所述靶点包括包括表皮生长因子受体 (EGFR)、 血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)、 血小板衍生生长因子受体(PDGFR)、 成纤维细 胞生长因子受体(FGFR)、 胰岛素受体(InsR)、 布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)、 HER2、 CTLA、 CD20、 CD52、 CD30、 CD33、 CD133、 PD ‑1、 PD‑L1、 Src、 Abl、 磷酯酰肌醇3 ‑激酶(PI3 K)、 蛋白激酶B(PKB/ Akt)、 雷帕霉素靶体蛋白(mTOR)、 丝苏氨酸蛋白激酶Ras、 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、 STAT1、 STAT3、 STAT5等。 10.一种多功能活性分子， 其具有两种或更多种功能活性， 其中至少一种功能活性为 TGF‑β 结合活性， 且所述TGF ‑β 结合活性由具有权利要求1 ‑4任一所述TGF ‑β RII突变体的氨 基酸序列的多肽片段 带来。 11.如权利要求10所述多功能活性分子， 其特征在于， 所述功能活性还包括抗原结合活 性、 配体结合活性、 细胞因子活性、 细胞毒性、 标记活性。 12.如权利要求10 ‑11任一所述多功能活性分子， 其特征在于所述功能活性还包括对以 下分子的结合活性， 表皮生长因子受体(EGFR)、 血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)、 血小 板衍生生长因子受体(PDGFR)、 成纤维细胞生长因子受体(FGFR)、 胰 岛素受体(InsR)、 布鲁 顿酪氨酸激酶(BTK)、 HER2、 CT LA、 CD20、 CD52、 CD30、 CD33、 CD133、 PD ‑1、 PD‑L1、 Src、 Abl、 磷酯 酰肌醇3‑激酶(PI3K)、 蛋白激酶B(PKB/Akt)、 雷帕霉素靶体蛋白(mTOR)、 丝苏氨酸蛋白激酶 Ras、 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、 STAT1、 STAT3、 STAT5等。 13.一种抗体 ‑TGF‑β RII缀合分子， 其中所述抗体靶向肿瘤治疗靶点， 所述TGF ‑β RII具 有权利要求1 ‑4任一所述TGF ‑β RII突变体的氨基酸序列。 14.如权利 要求13所述抗体 ‑TGF‑β RII缀合分子， 其中所述抗体特异性靶向表皮生长因权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 113968903 A 2子受体(EGFR)、 血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)、 血小板衍生生长因子受体(PDGFR)、 成 纤维细胞生长因子受体(FGFR)、 胰岛素受体(InsR)、 布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)、 HER2、 CTLA、 CD20、 CD52、 CD30、 CD33、 CD133、 PD ‑1、 PD‑L1、 Src、 Abl、 磷酯酰肌醇3 ‑激酶(PI3 K)、 蛋白激酶B (PKB/Akt)、 雷帕霉素靶体蛋白(mTOR)、 丝苏氨酸蛋白激酶Ras、 丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)、 STAT1、 S TAT3、 STAT5； 优选EGFR、 VEGFR、 PDGFR、 FGFR、 HER2、 CTLA、 CD20、 CD133、 PD ‑1、 PD‑L1。 15.如权利 要求13所述抗体 ‑TGF‑β RII缀合分子， 其 中所述抗体为鼠源抗体、 嵌合抗体、 人源化抗体、 Fab、 Fab'、 F(ab')2、 Fv、 scFv、 纳米抗体。 16.如权利要求13所述抗体 ‑TGF‑β RII缀合分子， 其中所述抗体为抗人PD ‑L1抗体或其 抗原结合片段， 其中抗人PD ‑L1抗体或其抗原结合片段的重链具有CDR1为SEQ  ID NO:25、 CDR2为SEQ  ID NO:26、 CDR3为SEQ  ID NO:27， 轻链具有CDR1为SEQ  ID NO:28、 CDR2为SEQ  ID  NO:29、 CDR3为SEQ  ID NO:30。 17.如权利要求13所述抗体 ‑TGF‑β RII缀合分子， 其 中所述抗体为抗人PD ‑L1纳米抗体， 抗人PD‑L1纳米抗体的氨基酸序列为SEQ  ID NO:20。 18.如权利要求16 ‑17任一所述抗体 ‑TGF‑β RII缀合分子， 其特征在于所述TGF ‑β RII通 过连接肽与抗人P D‑L1抗体连接， 其中所述连接肽优选包括(G4S)n， 其中n 为1‑4的整数。 19.一种组合物， 包含权利 要求1‑4任一所述的TGF ‑β RII突变体、 权利要求5 ‑9任一所述 融合蛋白、 权利要求10 ‑12任一多功能活性分子、 或权利要求13 ‑18任一所述缀合物， 以及药 学上可接受的辅料。 20.一种核酸， 其编码权利 要求1‑4任一所述的TGF ‑β RII突变体、 权利要求5 ‑9任一所述 融合蛋白、 权利要求10 ‑12任一多功能活性分子、 或权利要求13 ‑18任一所述 缀合物。 21.一种重组载体或重组宿主细胞， 其包括权利要求20所述核酸。 22.一种制备产品的方法， 其特征在于利用权利要求20所述核酸、 或权利要求21所述重 组载体或重组宿主细胞， 制备TGF ‑β RII突变体、 其融合蛋白、 其多功能活性分子、 或其缀合 物。 23.一种降低或消除重组蛋白降解或 断裂的方法， 所述重组蛋白包括TGF ‑β RII片段， 所 述方法包括对重组蛋白的TGF ‑β RII片段的编码区进行突变， 使其编码的TGF ‑β RII相对于野 生型TGF‑β RII在一个或多个选自由以下位点所 组成的组中的氨基酸残基位点处引入突变： 第6位、 第12位、 第20位； 所述野生型TGF ‑β RII的氨基酸残基编码顺序根据SEQ  ID NO:6确 定。 24.如权利要求23所述降低或消除重组蛋白降解或断裂的方法， 其特征在于TGF ‑β RII 片段相对于野生型TGF ‑β RII