(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110797551.5 (22)申请日 2021.07.14 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113402590 A (43)申请公布日 2021.09.17 (73)专利权人 呈诺再生医学 科技 （珠海横琴新 区） 有限公司 地址 519000 广东省珠海市横琴新区豆蔻 路1号粤澳合作中医药科技产业园科 研总部大楼3 01室-066 (72)发明人 尹乐　顾雨春　 (74)专利代理 机构 北京预立 生科知识产权代理 有限公司 1 1736 专利代理师 李红伟　孟祥斌 (51)Int.Cl. C07K 7/08(2006.01) C07K 19/00(2006.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 15/867(2006.01) C12N 7/01(2006.01)C12N 5/10(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61K 47/66(2017.01) A61P 35/00(2006.01) G01N 33/574(2006.01) (56)对比文件 CN 112979760 A,2021.0 6.18 WO 2021136538 A1,2021.07.08 EP 3632460 A1,2020.04.08 CN 107148469 A,2017.09.08 王子龙等.“前列腺特异性膜抗原在泌尿系 统肿瘤中的诊 疗进展”. 《肿瘤综合治 疗电子杂 志》 .2020,第6卷(第4期),第6 3-68页. Hao Dong等.“Binding Peptide-Guided Immobilization of Lipases w ith Sign ifi cantly Improved Catalytic Performance Using Escherichia coli BL21(DE 3) Biofilms as a Platform ”. 《ACS Ap pl. Mater. Interfaces》 .2021,第13卷(第5期),第6172页表 1. 审查员 杨荞嘉 (54)发明名称 KHL多肽及其在制备TABP- EIC细胞中的应用 (57)摘要 本发明提供了KHL多肽及其在制备TABP ‑EIC 细胞中的应用， 另外本发明还提供了KHL多肽缀 合物、 包含KHL多肽的肿瘤抗原结合多肽、 DNA分 子、 载体、 宿主细胞和药物组合物。 所述肿瘤抗原 结合多肽由KHL多肽、 跨膜结构域和/信号转导结 构域组成。 权利要求书1页 说明书10页 序列表5页 附图2页 CN 113402590 B 2022.05.10 CN 113402590 B 1.一种肿瘤抗原结合肽， 所述肿瘤抗原结合肽的氨基酸序列如SEQ  ID NO:5所示。 2.一种DNA分子， 其特 征在于， 所述DNA分子编码权利要求1所述的肿瘤抗原结合肽。 3.如权利要求2所述的DNA分子， 其特征在于， 所述DNA分子的核苷酸序列如SEQ  ID NO: 10所示。 4.一种载体， 其特 征在于， 所述载体包 含权利要求2所述的DNA分子 。 5.如权利要求4所述的载体， 其特征在于， 所述载体包括质粒、 慢病 毒载体、 腺病毒载体 或逆转录病毒载体。 6.如权利要求 4所述的载体， 其特 征在于， 所述载体还 包括一种或多种调控元件。 7.一种宿主细胞， 其特征在于， 所述宿主细胞包含权利要求1所述的肿瘤抗原结合肽、 权利要求2所述的DNA分子和权利要求 4所述的载体中的一种或多种。 8.如权利要求7所述的宿主细胞， 其特征在于， 所述宿主细胞包括大肠杆菌， 链霉菌、 农 杆菌、 酵母细胞、 植物细胞、 动物细胞或病毒。 9.如权利要求8所述的宿主细胞， 其特 征在于， 所述病毒是慢病毒。 10.如权利要求8所述的宿主细胞， 其特 征在于， 所述动物细胞 是人免疫细胞。 11.如权利要求10所述的宿主细胞， 其特 征在于， 所述人免疫细胞 是NK细胞。 12.一种药物组合物， 其特征在于， 所述药物组合物包含权利要求1所述的肿瘤抗原结 合肽、 权利要求2所述的DNA分子和权利要求4所述的载体和权利要求7所述的宿 主细胞中的 一种或多种。 13.如权利要求12所述的药物 组合物， 其特征在于， 所述药物组合物还包括药学上可接 受的免疫调节剂。 14.一种制备权利要求7所述的宿主细胞的方法， 其特征在于， 所述方法包括将权利要 求2所述的DNA分子和权利要求 4所述的载体中的一种或多种导入宿主细胞中的步骤。 15.如权利要求14所述的方法， 其特征在于， 所述导入宿主细胞的方法包括基因枪法、 电转法、 病毒转 导法或热激法。 16.权利要求1所述的肿瘤抗原结合肽、 权利要求2或3所述的DNA分子、 权利要求4 ‑6任 一所述的载体、 权利要求7 ‑11任一所述的宿 主细胞或权利要求 12或13所述的药物组合物在 制备治疗前列腺癌的药物中的应用。 17.氨基酸序列如SEQ  ID NO:1所示的KHL多肽在制备诊断前列腺癌的试剂盒中的应 用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113402590 B 2KHL多肽及其在制备TABP ‑EIC细胞中的应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术领域， 具体涉及一种KHL多肽及其在制备TABP ‑EIC细胞中的 应用。 背景技术 [0002]肿瘤嵌合抗原受体(CAR)疗法， 指的是一种新型精准靶向疗法， 近几年通过优化改 良在临床肿瘤治疗上取得很好的效果， 是一种非常有前景 的， 有可能治愈癌症的新型肿瘤 免疫治疗 方法。 通常， CAR通过基因工程技术， 将免疫细胞激活， 并装 上定位导航装置CAR， 将 普通的T细胞、 NK细胞对应地重组为CAR ‑T细胞、 CAR ‑NK细胞， CAR ‑T细胞、 CAR ‑NK细胞能够利 用其嵌合的CAR， 专门识别体内肿瘤细胞， 并通过免疫作用释放大量的多种效应因子， 能够 高效地杀灭肿瘤细胞， 从而达到治疗恶性肿瘤的目的。 另外， 将定位敲入CAR的免疫细胞移 植回原患者身体内， 可避开自身免疫系统的攻击难题。 [0003]自然杀伤(natural  killer， 缩写NK)细胞是非特异性免疫系统的重要组成部分， 先天免疫系统反应的关键性介质细胞。 NK细胞是一种广谱免疫细胞， 具有快速发现和摧毁 异常细胞(如癌症或病毒感染的细胞)的特异功能， 而且不需要提前致敏或HLA配型， 即可展 示强大的溶解异常细胞的活性。 但NK细胞数量较少， 在外周血中仅占淋巴细胞的10％ ‑ 15％， 在脐带血中NK的含量更低， 只有5％左右， 正常人体外周血中和脐带血中NK细胞含量 远远不能满足临床治疗的需要。 NK细胞的数量和纯度是临床疗效的重要影响因素， NK细胞 数量太少不能达 到治疗的效果， 纯度低则会影响对肿瘤的杀伤作用。 [0004]嵌合抗原受体(chimeric  antigen receptor， 缩写CAR)修饰的免疫细胞使用遗传 工程手段修饰免疫细胞使其表达外源性抗肿瘤基因。 CAR基因主要包括细胞外识别域和细 胞内信号转导结构域： 前者用于识别肿瘤表面特异性分子， 后者用于启动识别肿瘤表面分 子后的免疫细胞应答， 发挥细胞毒作用。 [0005]经过CAR结构修饰后的NK细胞， 能够 高效的识别肿瘤细胞， 并通过释放杀伤介质、 诱导靶细胞凋亡等多种手段杀伤肿瘤细胞。 但是现有技术制备CAR ‑NK细胞存在制备方法操 作复杂， 制备的细胞活性 不够、 数量少的问题。 [0006]本发明通过噬菌体展示技术筛选到了与肿瘤特异性结合效率更好的KHL多肽， 并 验证了该多肽的特异性。 KHL多肽与可检测标记物结合后可用于癌症标记物PSMA的检测， KHL多肽制备成的TABP ‑EIC(Tumor Antigen Binding Peptide ‑Engineering  Immune  Cell， 肿瘤抗原结合肽 ‑工程化免疫细胞)细胞 可以精准靶向表达P SMA的细胞。 发明内容 [0007]本发明提供了一种与PSMA(前列腺特异性膜抗原)特异性结合的KHL多肽及其缀合 物、 肿瘤抗原结合肽、 DNA分子、 载体和宿主细胞。 [0008]多肽 [0009]一方面， 本发明提供了一种与PSMA特异性结合的KHL多肽， 所述KHL多肽选 自以下说　明　书 1/10 页 3 CN 113402590 B 3