(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110796450.6 (22)申请日 2021.07.14 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113429488 A (43)申请公布日 2021.09.24 (73)专利权人 海正生物制药有限公司 地址 311404 浙江省杭州市富阳区胥口镇 海正路8号 专利权人 浙江博锐生物制药有限公司 (72)发明人 周雅琼　高章照　吴振华　聂磊　 胡锋　齐健　王海彬　 (74)专利代理 机构 北京永新同创知识产权代理 有限公司 1 1376 专利代理师 栾星明　程大军(51)Int.Cl. C07K 19/00(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 47/64(2017.01) A61K 38/17(2006.01) A61K 9/00(2006.01) A61K 45/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/02(2006.01) A61P 37/04(2006.01) 审查员 周惠 (54)发明名称 GITR/TGF-β双靶向融合蛋白及其用途 (57)摘要 本发明涉及生物医药领域。 具体而言， 本发 明公开了GITR/TGF ‑β双靶向融合蛋白、 包含其 的缀合物和药物组合物， 以及所述融合蛋白或缀 合物在制备 药物中的用途。 权利要求书1页 说明书27页 序列表20页 附图6页 CN 113429488 B 2022.08.30 CN 113429488 B 1.一种融合蛋白， 其从N端至 C端包含： 第一多肽 –第二多肽 –第三多肽  式(1)； 或者 第三多肽 –第二多肽 –第一多肽  式(2)； 其中 所述第一多肽包 含TGF‑β RⅡ的胞外结构域(TGFBR2 ‑ECD)； 所述第二多肽从N端至 C端具有如下 结构： Lk1–Dd–Lk2， 其中 Dd为二聚化结构域； Lk1和Lk2各自独立 地为接头或不存在； 并且 所述第三多肽从N端至 C端具有如下 结构： Sd1–Ln1–Sd2–Ln2–Sd3， 其中 Sd1、 Sd2和Sd3各自独立 地为GITRL胞外结构域； Ln1和Ln2各自独立 地为接头或不存在； 其中所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ  ID NO:15或SEQ  ID NO:16所示。 2.一种多 核苷酸， 其编码权利要求1的融合蛋白。 3.一种表达载体， 其包 含权利要求2的多 核苷酸。 4.一种宿主细胞， 其包 含权利要求2的多 核苷酸或权利要求3的表达载体。 5.权利要求 4的宿主细胞， 其 为真核细胞。 6.权利要求 4的宿主细胞， 其 为酵母细胞或哺乳动物细胞。 7.权利要求 4的宿主细胞， 其 为免疫效应细胞。 8.权利要求 4的宿主细胞， 其 为效应T细胞。 9.一种缀 合物， 其包 含与至少一种治疗剂缀 合的权利要求1的融合蛋白。 10.权利要求9的缀 合物， 其中所述治疗剂为可检测标记 物。 11.权利要求9 的缀合物， 其中所述治疗剂选自化疗剂、 细胞毒素、 放射性核素、 免疫检 查点抑制剂、 细胞因子和酶。 12.一种药物组合物， 其包 含： (ⅰ)权利要求1的融合蛋白， 以及 (ⅱ)药学上可接受的载剂。 13.权利要求的12药物组合物， 其制备为注射液。 14.权利要求1的融合蛋白或者权利要求12或13的药物组合物在制备药物中的用途， 其 中所述药物用于激活GITR信号传导和抑制TGF ‑β 信号传导来治疗癌症， 所述癌症选自肉瘤、 白血病、 鳞状细胞癌、 小细胞肺癌、 非小细胞肺癌、 胃肠癌、 霍奇金和非霍奇金淋巴瘤、 胰腺 癌、 神经胶质瘤、 宫颈癌、 卵巢癌、 肝癌、 膀胱癌、 乳癌、 子宫内膜癌、 骨髓瘤、 肾癌、 基底细胞 癌、 黑素瘤、 前列腺癌、 外阴癌、 睾丸癌、 食管癌和头 颈癌。 15.权利要求14的用途， 其中所述癌症选自结肠直肠癌、 唾液腺癌和甲状腺癌。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113429488 B 2GITR/TGF ‑β双靶向融合蛋白及其用途 技术领域 [0001]本发明涉及生物医药领域。 具体而 言， 本发明公开了GITR/T GF‑β 双靶向融合蛋白、 包含其的缀 合物和药物组合物， 以及所述融合蛋白或缀 合物在制备 药物中的用途。 背景技术 [0002]免疫疗法治疗选择广泛， 包括多种方法。 迄今为止， 最成功的治疗方案之一是免疫 检查点抑制剂(例如抗PD ‑L1抗体和抗PD ‑1抗体)治疗， 其可在多种晚期肿 瘤中表现出高度 持久的反应和显著延长的整体生存期。 尽管检查点抑制剂在抗癌治疗中取得了进展， 但绝 大多数患者对检查 点抑制剂仍无响应。 [0003]转化生长因子 ‑β(TGF‑β )是属于转化因子超家族的多功能细胞因子。 TGF ‑β 信号通 路由TGF‑β I型受体(TGF ‑β RI)和TGF ‑β II型受体(TGF ‑β RII)组成的TGF ‑β 受体复合物介导， 调控细胞生长、 增殖、 分化、 凋亡、 迁移等重要细胞过程。 TGF ‑β信号通路与肿 瘤发生和发展 密切相关。 在一方面， TGF ‑β 有助于肿瘤细胞上皮 ‑间充质转化(EMT)， 促进肿瘤细胞浸润和 转移。 在另一方面， TGF ‑β 抑制T细胞和B细胞的增殖并抑制B淋巴细胞产生免疫因子， 也可以 通过抑制抗原提呈细胞(如树突状细胞)的功能减弱T细胞的活性， 通过多种机制抑制免疫 系统的抗肿瘤反应。 此外， TGF ‑β 可以通过刺激血 管生成促进肿瘤 细胞的生长和转移。 [0004]现有技术中已开发了一些TGF ‑β抑制剂， 例如TGF ‑β Trap(二聚的TGF ‑β RⅡ的胞外 结构域， 参见例如W O2015118175A2和W O2018205985A1)和抗TGF ‑β 单克隆抗体fresoli mumab (参见例如US7723486B2)。 临床上使用TGF ‑β 抑制剂与抗PD ‑L1抗体或抗PD ‑1抗体联合疗法 解除免疫系统的抑制， 从而增强抗肿瘤治疗效果。 例如， WO2018205985A1和W O2015118175A2 公开了的抗PD ‑L1抗体和 TGF‑β Trap的双功能分子， 可以同时阻断TGF ‑β信号通路并抑制免 疫检查点， 用于癌症治疗。 [0005]糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(Glucocorticoid ‑induced  tumor  necrosis factor receptor， GITR或AITR)是肿瘤坏死因子受体超家族(TNF RSF)中的一员。 GITR在调节性T细胞(regulatory  T cells， Treg)表面高表达， 在幼 稚T细胞和记忆T细胞表 面有较低的表达。 当效应T细胞(effector  T cells， Teff)被激活后， GITR的表达水平会在 短时间内快速升高。 GITR信号传导在免疫调节中起重要作用。 一方面， T eff表面GITR的激活 可以促进Teff细胞的增殖和存活， 从而增强免疫功能。 在另一方面， Treg表 面GITR的激活促 使Treg细胞衰竭， 从而间接的起到 激活Teff功能的作用。 发明内容 [0006]在一方面， 本 发明提供一种靶向GITR和TGF ‑β 的双靶向融合蛋白， 其从N端至C端包 含： [0007]第一多肽 –第二多肽 –第三多肽   式(1)； [0008]或者 [0009]第三多肽 –第二多肽 –第一多肽   式(2)；说　明　书 1/27 页 3 CN 113429488 B 3