ICS  65.020 B 16 DB34 安 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 3127—2018 瓜蒌根结线虫病的病原检测和防治 技术规程 Technical regulation for pathogen detection and disease control of Root-knot nematode disease on Trichosanthes kirilowii 文稿版次选择 2018 - 04 - 16 发布 安徽省质量技术监督局 2018 - 05 - 16 实施 发 布 DB34/T 3127—2018 前    言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由潜山县植物检疫保护站提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：潜山县植物检疫保护站、安徽农业大学植物保护学院。 本标准主要起草人：吴彩玲、吴慧平、徐劲峰、鞠玉亮、黄为民、吴彩萍、李武伦、朱松涛、吴智。 I DB34/T 3127—2018 瓜蒌根结线虫病的病原检测和防治技术规程 1 范围 本标准规定了瓜蒌根结线虫病的症状识别、病原物鉴定、防治原则和防治措施等方面的内容。 本标准适用于安徽省瓜蒌根结线虫病的病原检测和防治技术。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 8321（所有部分） 农药合理使用准则 NY/T 496 肥料合理使用准则 通则 NY/T 1276 农药安全使用规范总则 DB34/T 882 食用栝楼栽培技术规程 3 症状识别 3.1 在瓜蒌田间查找生长缓慢、矮化、黄化的瓜蒌植株，拔起植株观察根系，如根系上出现根结、须 根团，可初步判断为根结线虫病危害，区别于缺水缺肥症状。撕开根结处表皮，如发现针尖大小白色小 点，即为根结线虫雌虫，区别于根肿病、根癌病。 3.2 根部症状可参照附录 A 进行判断。 4 病原物鉴定 4.1 形态学鉴定 根结线虫的形态学鉴定基于二龄幼虫和雌虫的形态及其测计值，具体流程如下： ——用挑针剥离瓜蒌根结上的卵块，25℃处理 24 h 孵化二龄幼虫，此外，用挑针剥离根结处雌虫。 ——在显微镜下观察二龄幼虫和雌虫形态，并对其主要形态进行测计，测计值需遵循 De Man 公式。 根结线虫二龄幼虫和雌虫的形态描述参照附录B，测计值参照附录C，根据形态及其测计值即可判断 是否为根结线虫。 4.2 分子生物学鉴定 根结线虫分子生物学鉴定基于单条二龄幼虫或雌虫，具体流程如下： ——用挑针剥离瓜蒌根结上的卵块，25℃处理 24 h 孵化二龄幼虫，或用挑针剥离根结处雌虫。 2+ ——将单条二龄幼虫置于含 8 μL ddH2O 和 1 μL 10×Ex Taq Buffer（Mg free）的 200 μL PCR 管中；液氮中处理 1 min，95℃处理 2 min，重复三次；向 PCR 管中加入 1 μL 1 mg/mL 蛋 白酶 K，65℃温育 1 h 后，95℃处理 10 min。 所得单条线虫 DNA 用于下游的 PCR 检测试验。 1 DB34/T 3127—2018 以 单 条 根 结 线 虫 DNA 为 模 板 ， 用 南 方 根 结 线 虫 特 异 性 SCAR 标 记 检 测 引 物 （ Mi-F ： GTGAGGATTCAGCTCCCCAG， Mi-R： ACGAGGAACATACTTCTCCGTCC ）进行 PCR 检 测。 PCR 扩增程序：94℃ 4 min；94℃ 30 s，58℃ 30 s；72℃ 1 min，35 个循环；72℃ 10 min。 PCR 产物经 1.5％琼脂糖凝胶电泳检测，根据 PCR 产物片段大小进行判断，若扩增片段为 955 bp， 则为南方根结线虫。 扩增片段大小参见附录E。 5 防治原则 5.1 按照“预防为主，综合防治”的方针，以农业防治和健身栽培为基础，采取农业防治、物理防治、 生物防治与化学防治相结合的防治策略。 5.2 减少化学农药使用，并按照 GB/T 8321 和 NY/T 1276 的规定执行。 6 防治措施 6.1 农业防治 6.1.1 无病种苗培育 6.1.1.1 6.1.1.2 6.1.2 选择不携带根结线虫的种子和块根做繁殖材料。 选择土层深厚、土质疏松、肥力充足、排灌方便，未发生过根结线虫病害的田块培育幼苗。 新栽田块的防治方法 6.1.2.1 选择土层深厚、土质疏松、肥力充足、排灌方便、未发生过根结线虫病害的田块进行种植。 6.1.2.2 使用无病种苗，起垄种植，垄高不低于 40 cm，垄间距离约 100 cm，排水沟深约 50 cm，栽 培措施应符合 DB34/T 882 的规定，移栽前进行土壤消毒。 6.1.3 已发病田块的控制措施 6.1.3.1 秋季深耕翻晒、夏季高温薄膜封闭，有条件田块可采用冬季灌深水 2 周以上。 2 6.1.3.2 增施有机肥：每年 12 月～翌年 2 月，按每 667 m 沟施经无害化处理后的油菜籽饼肥 1240 kg， 施肥深度大于 20 cm，田间水肥管理应符合 NY/T 496 的规定。 6.2 物理防治 播种前，用 55℃热水处理瓜蒌种子 3 min～5 min，或 55℃热水浸泡块根 10 min，处理后及时摊 凉。 6.3 生物防治 2 6.3.1 瓜蒌移栽定植时，按每 667 m 穴施 100 亿活孢子/g 淡紫拟青霉颗粒剂 1 kg，定植后 60 天结合 2 浇水灌根每 667 m 补施 2 kg。 2 6.3.2 瓜蒌移栽定植时，按每 667 m 施用蜡质芽孢杆菌 1 kg，定植后 60 天结合浇水穴施或灌根每 667 2 m 补施 1 kg。 2 6.3.3 利用茼蒿趋避根结线虫：每年 3 月～4 月、7 月～8 月，在瓜蒌行间按每 667 m 播撒茼蒿种子 1 kg，覆盖 5 cm～10 cm 土层，距离瓜蒌茎基部 15 cm 以外范围均可播撒。 2 DB34/T 3127—2018 6.3.4 利用万寿菊矮生种趋避根结线虫：每年 3 月～4 月，在瓜蒌行间播撒万寿菊矮生种， 覆盖 5 cm～ 10 cm 土层，距离瓜蒌茎基部 15 cm 以外范围均可播撒，成株可旋翻入土，做绿肥。 6.4 化学防治 6.4.1 防治适期 3 月中下旬进行化学防治，6 月上旬可适当防治一次。同种药剂防治次数不宜超过两次。 6.4.2 防治方法 2 6.4.2.1 按每 667 m 拌土沟施或环施 1.0％阿维菌素颗粒剂 2 kg～3 kg，施药深度 15 cm 左右。 6.4.2.2 瓜蒌移栽后 7 天～15 天，每株用 41.7％氟吡菌酰胺悬浮剂 0.3 mL～0.5 mL 灌根，或每 667 2 m 用量 30 mL～50 mL，根据土壤湿润情况适当稀释，用水量不低于 2000 mL/株。 2 6.4.2.3 移栽前，按每 667 m 施 10％噻唑膦 1.5 kg～2.0 kg，施药深度 15 cm～20 cm，施药当日定 植。 3 DB34/T 3127—2018 AA 附 录 A （资料性附录） 瓜蒌根结线虫病田间危害症状 瓜蒌根结线虫病田间危害症状见图A.1。 图A.1 4 DB34/T 3127—2018 BB 附 录 B （资料性附录） 根结线虫雌虫（1）和二龄幼虫（2）形态 根结线虫雌虫（1）和二龄幼虫（2）形态见图B.1。 图B.1 5 DB34/T 3127—2018 CC 附 录 C （资料性附录） 南方根结线虫形态描述 二龄幼虫：温热杀死后体直或略弯曲，中前部宽，向两端变细。头冠明显，前端平，头区与虫体界 限不明显。口针纤细，椎体和基杆的界限不明显，口针基部球小。中食道球椭圆形，瓣门明显，排泄孔 在中食道球后方约 25 μm。尾较长，透明尾末端界限不明显，透明尾有弯曲或不明显缢缩。尾尖尖圆或 钝圆。 雌虫：虫体呈珍珠白色，梨形，颈较短，与虫体分界不明显。头冠窄，头区环纹不明显，口针椎体 尖端钝尖，向后逐渐变粗。口针基杆圆柱形，向后略加粗，口针基部球多为扁球形，纵向窄，横向宽， 基部球前缘平，与基杆界限明显。背食道腺开口距口针基部球的距离中等；中食道球近球形，瓣门明显， 亚腹食道腺开口于瓣门后方。排泄孔位置靠前，其到头端的距离接近口针长度的 2 倍，不同个体排泄 孔的位置变化较大。会阴花纹背弓高，为长方形或梯形，线纹稀疏，较粗，出现不连续的波浪。阴门与 肛门之间无线纹。 6 DB34/T 3127—2018 DD 附 录 D （资料性附录） 南方根结线虫形态测计值 表D.1 测量值 长度单位：μm DGO N 标 本 数 S t 口针 长度 背食道 VA 腺开口 阴门至 到口针 肛门的 基本球 距离 VL 阴门 宽度 L 体长 W 虫体 宽度 TL 尾长度 TTL A C 透明尾 体长/最 体长/ 长度 大体宽 尾长 29.0 5.0 （26.7 （4.2 的距离 雌 1 虫 5 2 龄 幼 虫 5 2.20 19.8 21.1 （2.00 （14.8 （16.2 ～2.50） ～21.0） ～24.2） 11.3 317.0 13.9 52.4 （10.3 （301.0 （12.7 （40.0 ～11.9） ～360.0） ～15.0） ～58.0） 9.8 （5.0 ～ 12.6） ～32.1） ～6.8） 注：表中英文字母为 De Man 公式符号。 7 DB34/T 3127—2018 EE 附 录 E （资料性附录） 南方根结线虫 PCR 扩增片段 南方根结线虫 PCR 扩增片段见图E.1。 图E.1 _________________________________ 8