ICS 65.020.20 B 05 黑 龙 DB23 江 省 地 方 标 准 DB 23/T 2544—2019 黑穗醋栗组织培养育苗技术规程 2019 - 12 - 25 发布 黑龙江省市场监督管理局 2020 - 01 - 24 实施 发 布 DB23/T 2544—2019 前  言 本标准依据 GB/T 1.1-2009 的编写规则起草。 本标准由黑龙江省市场监督管理局提出。 本标准起草单位：黑龙江省农业科学院乡村振兴科技研究所。 本标准主要起草人：张鹍、宋德禄、李施扬、段亚东、宋鹏慧、刘海军、刘凤芝、秦栋、杨春梅、 梁文卫、杨光、周双、李鹏举、武新娟、杨大志、纪志贤。 1 DB23/T 2544—2019 黑穗醋栗组织培养育苗技术规程 1 范围 本标准规定了黑穗醋栗（Ribes nigrum L.）组织培养育苗技术的培养基的制备、消毒灭菌、材料 的选择与处理、初代培养、继代培养、生根培养、炼苗和移栽及生产档案。 本标准适用于黑穗醋栗组织培养育苗技术。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 8321（所有部分） 农药合理使用准则 NY/T 1276 农药安全使用规范 总则 LY/T 1882-2010 林木组织培养育苗技术规程 3 培养基的制备 培养基配制按LY/T 1882-2010中规定执行 3.1 初代培养基 MS + 1.0 mg·L-1 6-BA + 0.1 mg·L-1 IBA + 0.5 mg·L-1 GA3 + 30 g·L-1 蔗糖，pH 5.8。 3.2 继代培养基 MS + 2.0 mg·L-1 6-BA + 0.2 mg·L-1IBA+ 30 g·L-1 蔗糖，pH 5.8。 3.3 生根培养基 1/2 MS+0.1 mg·L-1 IBA +20 g·L-1 蔗糖，pH 5.8。 3.4 培养基保存 灭菌后的培养基放入接种室，常温条件下 7 d 内使用，2 ℃～4 ℃条件下 14 d 内使用。培养基应 保存于洁净环境中，注意避光和防尘。 4 消毒灭菌 4.1 材料消毒灭菌 将采取的植条用饱和洗衣粉水漂洗10 min，流水冲洗2 h后置超净工作台上用75 %的酒精消毒，无 菌水荡洗3次，每次3 min，再用0.1 %升汞消毒，无菌水荡洗5次，每次3 min，最后用无菌滤纸吸干植 物材料表面的水分。 2 DB23/T 2544—2019 4.2 培养基灭菌 瓶装培养基需在 12 h 内完成灭菌，采用高压蒸汽灭菌锅灭菌，在压力 1.1 MPa、温度 121 ℃条件 下灭菌 20 min。 4.3 器具的消毒灭菌 剪子、镊子、烧杯等接种器具用高压灭菌锅在压力1.1 MPa，温度121 ℃以下灭菌20 min。 5 材料的选择与处理 5.1 材料的选择 从生长健壮、无病虫害的母株上选取半木质化枝条、茎尖作为材料。 5.2 接种 取下培养瓶的封口膜，将培养瓶口和镊子在酒精灯外焰上旋转灼烧消毒并冷却后，把茎段、茎尖切 割成 0.5 cm～0.8 cm 后接种到培养基中，每个培养瓶放 3 个～5 个外植体，接种后盖上封口膜，并标 注日期。 6 初代培养 6.1 培养条件 培养室的温度控制在25 ℃±3 ℃，空气相对湿度70 %～80 %，光照强度1000 Lx，光照周期6 h/d。 6.2 培养方法 外植体生长约 30 d 左右，高 5 cm 后，剪成 1.0 cm～1.2 cm 的小段接种到初代培养基中。 7 继代培养 7.1 培养条件 培养室的温度控制在25 ℃±3 ℃，空气相对湿度70 %～80 %，光照强度2000 Lx～3000 Lx，光照 周期6 h/d。 7.2 培养方法 在无菌操净工作台上，将初代培养30 d左右生长健壮的小苗的顶芽或腋芽萌发形成的丛生芽，分割 成带单芽的茎段，接种于继代培养基中。每隔25 d～30 d将继代苗转接至相同培养基上继续培养。 8 生根培养 8.1 培养条件 培养条件按本标准6.1规定执行 8.2 培养方法 3 DB23/T 2544—2019 待继代培养苗长至高度2 cm～3 cm时，接种于生根培养基中。 9 炼苗和移栽 9.1 炼苗 生根20 d左右、根系1.0 cm～1.5 cm时，及时移栽。移栽前2 d～3 d先松开瓶口1 d后再打开瓶口, 置于温度25 ℃±3 ℃、通风、清洁的地方，不应阳光直射。 9.2 移栽 9.2.1 移植准备 选择温度、光照适宜，保温、保湿的温室或塑料棚内进行。选用50孔或70孔穴盘，基质为壤土、草 炭土和沙子混合，比例2：1：1。也可选用直径5 cm、高5 cm的蔬菜育苗钵或塑料营养钵，用500倍～800 倍敌克松溶液消毒，移栽前浇透水。 9.2.2 移栽 将组培苗从瓶中取出，放入20 ℃左右的水中，将附在根上的培养基洗去，勿伤根系，根系过长的 要适当修剪。将清洗后的组培苗用镊子将其栽入准备好的穴盘或营养钵中，栽后及时浇透水。 9.3 移栽后的管理 9.3.1 水份 栽后2 d～3 d淋一次水，定植后10 d～20 d内湿度控制在80 %～100 %，当第一片新叶展开后，此 后湿度一直控制在70 %左右。 9.3.2 温度 温度保持在15 ℃～30 ℃。 9.3.3 光照 移栽15 d内，光照强度控制在2000 Lx～5000 Lx。 9.3.4 病虫害防治 主要病虫害防治方法如下： a） 白粉病：可采用啶酰菌胺+醚菌脂防治； b） 蚜虫：可采用啶虫脒防治。 农药使用按GB/T 8321和NY/T 1276规定执行。 10 生产档案 应建立生产档案。包括：培养基的制备、消毒灭菌、材料的选择与处理、初代培养、继代培养、生 根培养、炼苗和移栽、病虫害防治等。 4