(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210977168.2 (22)申请日 2022.08.15 (71)申请人 新疆师范大学 地址 830054 新疆维吾尔自治区乌鲁 木齐 市沙依巴克区新医路19号 (72)发明人 关明　王莹　米芳　陈国通　 耿鹏飞　胡存明　 (74)专利代理 机构 合肥洪雷知识产权代理事务 所(普通合伙) 34164 专利代理师 张悦 (51)Int.Cl. G01N 21/01(2006.01) G01N 21/65(2006.01) (54)发明名称 一种无干 扰SERS探 针及其制备方法和应用 (57)摘要 本发明公开了一种无干扰SERS探针及其制 备方法和应用， 涉及表面增强拉曼光谱检测技术 领域。 本发明SERS探针的拉曼特征峰处于拉曼静 默区1800cm‑1‑2500cm‑1范围内； SE RS探针包括胶 体金结构， 设置在胶体金结构表面的银壳， 银壳 上连接若干拉曼报告分子苯乙炔， 苯乙炔的外侧 连接有多巴胺的自聚合包裹形成的聚多巴胺层， 聚多巴胺层的外侧连接有降钙素原抗体。 本发明 探针稳定性和重现性良好， 光学响应强； 可以解 决SERS探针在指纹区(300 ‑1800cm‑1)容易受到 内源性生物分子光学干扰， 从而导致定量分析准 确度降低的问题， 在单/多指标定量分析领域具 有良好的应用前 景。 权利要求书2页 说明书9页 附图3页 CN 115219428 A 2022.10.21 CN 115219428 A 1.一种无干扰SERS探针的制备 方法， 其特 征在于： 包括如下步骤： Stp1、 将氯金酸溶液液加热至沸腾， 加入柠檬酸三钠溶液， 保持沸腾并继续磁力搅拌， 得到胶体金； Stp2、 将胶体金中加入抗坏血酸溶液， 磁力搅拌下逐滴加入硝酸银溶液， 待胶体颜色变 为土黄色， 继续搅拌6min后离心， 并将沉淀物复溶于超纯水中， 得到核壳式SERS增强基底 Au@Ag； Stp3、 在磁力搅拌下， 向制备的Au@Ag中滴加苯 乙炔溶液， 然后加入Tris ‑HCl缓冲溶液 与多巴胺的混合溶液， 磁力搅拌2 ‑5min， 待溶液颜色为墨绿色后停止搅拌并离心， 原体积复 溶， 得到SERS标签Au@Ag@P DA‑EB； Stp4、 通过聚多巴胺表面的多巴胺醌， 在Au@Ag@PDA ‑EB的壳体表面修饰待测物的捕获 抗体， 合成对待测物具有高特异性识别的SERS探针。 2.根据权利要求1所述的一种无干扰SERS探针的制备方法， 其特征在于， 在所述Stp1 中， 具体为： 配制浓度为0.01％的氯金酸溶液100mL， 加热至沸腾后， 加入5mL浓度为1％柠檬 酸三钠溶液， 保持沸腾并磁力搅拌15mi n， 得到粒径约为18.3 ±1.5nm酒红色的Au  NPs胶体。 3.根据权利要求1所述的一种无干扰SERS探针的制备方法， 其特征在于， 在所述Stp2 中， 具体为将10mL的胶体金中加入1mL浓度为0.1M的抗坏血酸溶液， 磁力搅拌下逐滴加入 1mL浓度为10mM的硝酸银溶液， 待胶体颜色变为土黄色， 继续搅拌6min后离心， 并将沉淀物 复溶于10mL超纯 水中， 得到核壳 式SERS增强基底 Au@Ag； 在所述Stp3中， 向Stp2得到的Au@Ag中滴加1mL浓度为1mM苯乙炔溶液， 然后加入10mL混 合溶液， 所述混合溶 液为Tris ‑HCl缓冲溶 液与多巴胺的混合； 其中， 所述苯乙炔 溶液为苯乙炔 溶于乙醇中所 得。 4.根据权利要求1所述的一种无干扰SERS探针的制备方法， 其特征在于， 在所述Stp1 ‑ Stp3中， 所述磁力搅拌的转数为300 ‑500rpm； 在所述Stp2和Stp3中， 离心的转数为7000 ‑ 7800rpm、 时间为10 ‑15min。 5.一种无干扰SERS探针， 其特征在于： 通过权利要求1～4任一项所述的制备方法制备 得到。 6.根据权利 要求5所述的一种无干扰SERS探针， 其特征在于， 所述SERS探针的拉曼特征 峰处于拉曼静默区180 0cm‑1‑2500cm‑1范围内。 7.根据权利要求5所述的一种无干扰SERS探针， 其特征在于， 包括胶体金结构， 设置在 所述胶体金结构表面的银壳， 所述银壳上连接若干拉曼报告分子苯乙炔， 所述苯乙炔 的外 侧连接有多巴胺的自聚合包裹形成的聚多巴胺层， 所述聚多巴胺层的外侧连接有降钙素原 抗体。 8.权利要求5 ‑7任一项所述的一种无干扰SERS探针在人血清中疾病标志物降钙素原检 测方面的应用。 9.根据权利要求8所述的应用， 其特 征在于， 包括如下： S1、 PCT标准品的检测： S11、 在胎牛 血清中配制不同浓度的PCT标准溶 液； S12、 分别取1mL的标准溶液， 加入0.3mg功能化磁性纳米材料， 在摇床中25℃孵育 30min； 用pH＝7.4的PBS缓冲液洗涤3次后， 添加0.5mLSERS探针， 在37℃的摇床中孵育6min，权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115219428 A 2使抗原和抗体免疫结合； S13、 用便携式拉曼光谱仪完成检测后， 建立标准曲线， 同时根据标准曲线获得标准曲 线的线性方程； S2、 血清样本检测： S21、 取血清样本分为1mL/份， 并加入不同量的500ng/mL  PCT溶液， 充分混合30min， 配 制成不同浓度的加标 血清样本溶 液； S22、 分别取1mL不 同浓度的加标血清样本溶液， 加入0.3mg功能化磁性纳米材料， 在摇 床中25℃孵育30min； 用pH＝7.4的PBS缓冲 液洗涤3次后， 添加0.5mLSERS探针， 在37℃的摇 床中孵育6min， 使抗原和抗体免疫结合； S23、 用便携式拉曼光谱仪进行检测血清样本溶液的SERS信号强度， 根据标准曲线的线 性方程计算出加标 血清样本中PCT的浓度值。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特征在于， 所述功能化磁性纳米材料的合成主要包 括如下骤： S31、 Fe3O4纳米粒子的制备： 将FeCl  3·6H2O、 1.5g聚乙二醇和4.8g无水醋酸钠溶解于 60mL乙二醇， 磁力搅拌到完全溶解； 将溶液密封于PTFE ‑l ined高压反应釜中， 放入烘箱完 成反应； 取 出后， 分别用水和乙醇洗涤3次， 真空干燥过夜； S32、 Fe3O4@SiO2纳米粒子的制备： 取Fe3O4 NPs超声分散在乙醇 ‑水溶液中， 加入2.8mL   NH3·H2O和0.3mL  TEOS， 磁力搅拌90mi n， 分别用水和乙醇洗涤3次， 真空干燥； S33、 氨基功能化(AMNPs)： 将Fe3O4@SiO2超声分散在150mL乙醇中， 并加入5mL  APTES， 水 浴回流； 分别用水和乙醇洗涤3次， 真空干燥； S34、 聚乙烯亚胺修饰磁性纳米粒子： 将氨基功能化磁性材料超声分散到50mL戊二醛 ‑ 无水甲醇溶液中， 磁力搅拌10h； 用无水甲醇洗涤 4次后， 继续分散在50mL含聚乙烯 亚胺的无 水甲醇中， 磁力搅拌12h， 加入氰基硼氢化钠继续搅拌12h； 磁铁收集PEI ‑AMNPs， 分别用水和 乙醇洗涤3次， 真空干燥； S35、 硼酸功能化树枝状磁性材料： 将聚乙烯亚胺修饰磁性纳米粒子超声分散在含有4 ‑ 甲酰基苯硼酸和氰基硼氢化钠的50mL无水甲醇中， 磁力搅拌24h， 所得磁性材料分别用水和 乙醇洗涤3次， 真空干燥， 获得FPBA ‑PEI‑AMNPs树枝状 分子辅助硼酸功能化磁性纳米粒子封 存备用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115219428 A 3