(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211137274.6 (22)申请日 2022.09.19 (71)申请人 桂林优利特医疗电子有限公司 地址 541004 广西壮 族自治区桂林市高新 区信息产业园D- 07号 (72)发明人 叶志杰　黄艳妮　 (74)专利代理 机构 北京中济纬天专利代理有限 公司 11429 专利代理师 石燕妮 (51)Int.Cl. G01N 21/01(2006.01) G01N 21/31(2006.01) (54)发明名称 一种总胆汁酸检测试剂盒及其制备方法和 检测方法 (57)摘要 本发明涉及生物检测技术领域， 具体涉及一 种总胆汁酸检测试剂盒及其制备方法和检测方 法， 包括以两性离子缓冲液、 叠氮化钠、 非离子表 面活性剂、 氯化钠、 二元醇、 乙二胺四乙酸二钠盐 和硫代氧化型辅酶为原料制备第一试剂； 以咪 唑、 烷基乙醇胺、 叠氮化钠、 甘氨酸、 聚乙二醇、 还 原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸钠盐和3α ‑羟基类 固醇脱氢酶为原料制备第二试剂； 对第一试剂和 第二试剂进行组合， 得到总胆汁酸检测试剂盒， 总胆汁酸检测试剂盒在2℃～8℃避光密封条件 下保存， 有效期为12个月； 在2℃～8℃下开盖状 态使用效期为30天， 试剂无明显影 响， 性能稳定， 从而解决现有的总胆汁酸检测试剂保存及开盖 使用状态下稳定性差的问题。 权利要求书1页 说明书8页 附图2页 CN 115468913 A 2022.12.13 CN 115468913 A 1.一种总胆汁酸检测试剂盒的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 以两性离子缓冲液、 叠氮化钠、 非离子表面活性剂、 氯化钠、 二元醇、 乙二胺四乙酸二钠 盐和硫代氧化型辅酶为原料制备第一试剂； 以咪唑、 烷基乙醇胺、 叠氮化钠、 甘氨酸、 聚乙二醇、 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸钠 盐 和3α‑羟基类固醇脱氢酶为原料制备第二试剂； 对所述第一试剂和所述第二试剂进行组合， 得到总胆汁 酸检测试剂盒。 2.如权利要求1所述的一种 总胆汁酸检测试剂盒的制备 方法， 其特 征在于， 所述以两性离子缓冲液、 叠氮化钠、 非离子表面活性剂、 氯化钠、 二元醇、 乙二胺四乙酸 二钠盐和硫代氧化型辅酶为原料制备第一试剂的具体方式为： 使用纯化水分别对两性离子缓冲液、 叠氮化钠、 非离子表面活性剂、 氯化钠、 二元醇、 乙 二胺四乙酸 二钠盐和硫代氧化型辅酶进行 溶解， 得到第一溶解液； 使用盐酸或氢 氧化钠溶 液对所述第一溶解液的pH值进行调节， 得到第一调节液； 使用纯化水对所述第一调节液进行稀释后静置， 然后使用尼龙滤膜进行过滤， 得第一 试剂。 3.如权利要求2所述的一种 总胆汁酸检测试剂盒的制备 方法， 其特 征在于， 所述以咪唑、 烷基乙醇胺、 叠氮化钠、 甘氨酸、 聚乙二醇、 还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 钠盐和3α ‑羟基类固醇脱氢酶为原料制备第二试剂的具体方式为： 使用纯化水分别对咪唑、 烷基乙醇胺、 叠氮化钠、 甘氨酸和聚乙二醇进行溶解， 得到第 二溶解液； 使用盐酸或氢 氧化钠溶 液对所述第二溶解液的pH值进行调节， 得到第二调节液； 使用所述第 二调节液分别对还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸钠 盐和3α‑羟基类固醇脱氢 酶进行溶解， 得到第三溶解液； 使用纯化水对所述第三溶解液进行稀释后静置， 然后使用尼龙滤膜进行过滤， 得第二 试剂。 4.如权利要求3所述的一种 总胆汁酸检测试剂盒的制备 方法， 其特 征在于， 所述两性离子缓冲液的取量为5g/L ‑15g/L， 所述叠氮化钠的取量为0.5g/L ‑5g/L， 所述 非离子表面活性剂的取量为0.5g/L ‑5g/L， 所述氯化钠的取量为5g/L ‑10g/L， 所述二元醇的 取量为10mL/L ‑30mL/L， 所述乙二胺四乙酸二钠盐的取量为0.2g/L ‑10g/L， 所述硫代氧化型 辅酶的取量 为1g/L‑2g/L。 5.如权利要求 4所述的一种 总胆汁酸检测试剂盒的制备 方法， 其特 征在于， 所述咪唑的取量为5g/L ‑10g/L， 所述烷基乙醇胺的取量为10mL/L ‑30mL/L， 所述叠氮化 钠的取量为0.5g/L ‑5g/L， 所述甘氨酸的取量为0.5g/L ‑5g/L， 所述聚乙二醇的取量为5g/L ‑ 10g/L， 所述还原型烟酰胺腺嘌 呤二核苷 酸钠盐的取量为2g/L ‑4g/L， 所述3α ‑羟基类固醇脱 氢酶的取量 为5KU/L‑10KU/L。 6.一种总胆汁酸检测试剂盒， 采用 如权利要求1 ‑5所述的总胆汁酸检测试剂盒的制备 方法制备， 其特 征在于， 包括第一试剂和第二试剂。 7.一种总胆汁酸检测试剂 盒的检测方法， 其特征在于， 采用如权利要求6所述的总胆汁 酸检测试剂盒， 使用总胆汁 酸检测试剂盒定量检测血清样本中的总胆汁 酸含量。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115468913 A 2一种总胆汁酸检测试剂盒及其制备方 法和检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及 生物检测技术领域， 尤其涉及 一种总胆汁酸检测试剂盒及 其制备方法 和检测方法。 背景技术 [0002]胆汁酸是胆固醇在肝脏分解及消化道带着产物。 当肝细胞病变或肝内外阻塞时， 胆汁酸代谢发生障碍反流入血， 血清总胆汁酸浓度升高， 因此血清中的胆汁酸水平反 映了 肝实质性损伤的重要证据， 对肝炎、 乙醇肝损伤、 肝硬化 等肝病诊断具有重要意 义。 [0003]目前市售的总胆汁酸试剂盒主要采用第五代循环酶法， 其原理为血清中胆汁酸被 3α‑羟类固醇脱氢酶及β ‑硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型特异性地氧化， 生成3 ‑酮类固 醇及β‑硫代烟酰胺腺嘌 呤二核苷酸还原型。 此外， 生成的3 ‑ 酮类固醇在3α ‑HSD及β‑硫代烟 酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型作用下， 生成胆汁酸及β ‑硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型。 血清中微量的胆汁酸在多次酶循环过程中被放大， 同时可使生成的Thio ‑NADH扩增。 在 405nm处测定Thio ‑NADH 吸光度变化值， 以求得血清中TBA的含量。 该方法具有灵敏度高、 对 生化仪器管道无污染及检测快速等优点， 但也存在抗干扰性能不强且2～8℃保存不稳定， 特别是开盖使用状态下 稳定性较差的缺 点。 发明内容 [0004]本发明的目的在于提供一种总胆汁酸检测试剂盒及其制备方法和检测方法， 旨在 解决现有的总胆汁 酸检测试剂保存稳定性差的问题。 [0005]为实现上述目的， 第一方面， 本 发明提供了一种总胆汁酸检测试剂盒的制备方法， 包括以下步骤： [0006]以两性离子缓冲液、 叠氮化钠、 非离子表面活性剂、 氯化钠、 二元醇、 乙二胺四乙酸 二钠盐和硫代氧化型辅酶为原料制备第一试剂； [0007]以咪唑、 烷基乙醇胺、 叠氮化钠、 甘氨酸、 聚乙二醇、 还原 型烟酰胺 腺嘌呤二核苷酸 钠盐和3α ‑羟基类固醇脱氢酶为原料制备第二试剂； [0008]对所述第一试剂和所述第二试剂进行组合， 得到总胆汁 酸检测试剂盒。 [0009]其中， 所述以两性离子缓冲液、 叠氮化钠、 非离子表面活性剂、 氯化钠、 二元醇、 乙 二胺四乙酸 二钠盐和硫代氧化型辅酶为原料制备第一试剂的具体方式为： [0010]使用纯化水分别对两性离子缓冲液、 叠氮化钠、 非离子表面活性剂、 氯化钠、 二元 醇、 乙二胺四乙酸 二钠盐和硫代氧化型辅酶进行 溶解， 得到第一溶解液； [0011]使用盐酸或氢 氧化钠溶 液对所述第一溶解液的pH值进行调节， 得到第一调节液； [0012]使用纯化水对所述第一调节液进行稀释后静置， 然后使用尼 龙滤膜进行过滤， 得 第一试剂。 [0013]其中， 所述以咪唑、 烷基乙醇胺、 叠氮化钠、 甘氨酸、 聚乙二醇、 还原型烟酰胺腺嘌 呤二核苷酸钠盐和3α ‑羟基类固醇脱氢酶为原料制备第二试剂的具体方式为：说　明　书 1/8 页 3 CN 115468913 A 3