(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210872977.7 (22)申请日 2022.07.22 (71)申请人 上海青瑞 食品科技有限公司 地址 201200 上海市浦东 新区康新公路 3399弄25号1213室 (72)发明人 纪明华　沈学军　张颖　刘连碧　 (74)专利代理 机构 杭州创信知识产权代理有限 公司 33383 专利代理师 阴知见 (51)Int.Cl. G01N 21/31(2006.01) G01N 21/01(2006.01) (54)发明名称 一种2′-岩藻糖基乳糖的快速检测试剂盒及 其应用 (57)摘要 本发明提供了一种酶法检测2' ‑岩藻糖基乳 糖试剂盒。 该试剂盒由试剂1、 试剂2、 试剂3和试 剂4按1份： 2份： 5份： 5份的比例组成。 试剂1由以 下成分组成： α‑1,2‑岩藻糖苷酶1 ‑10KU， 用0.1M 的磷酸盐缓冲液定容至100mL。 试剂2由以下成分 组成： 乳糖酶1 ‑6KU， 用0.1M的磷酸 盐缓冲液定容 至100mL。 试剂3由以下成分组成： 辣根过氧化物 酶0.2‑10KU， 葡萄糖氧化酶2 ‑12KU， 4氨 基安替比 林20‑200mg， 用0.1M的磷酸盐缓冲液定容至 100mL。 试剂4由以下成分组成： 苯酚或对羟基苯 甲酸0.2 ‑1g， 用0.1M的磷酸盐缓冲液定容至 100mL。 本发明的试剂盒测试条件温和， 无需昂贵 仪器， 检测速度快， 操作方便， 重现性良好， 适用 于2'‑岩藻糖基乳糖及其它类似化合物的快速检 测， 有较大的应用价 值。 权利要求书1页 说明书8页 附图4页 CN 115452740 A 2022.12.09 CN 115452740 A 1.一种酶法检测2' ‑岩藻糖基乳糖试剂 盒， 其特征在于： 提供了一种基于酶法测定样品 中2'‑岩藻糖基乳糖的方法。 2.根据权利要求1所述的2' ‑岩藻糖基乳糖试剂盒， 其特征在于： 该试剂盒由试剂1、 试 剂2、 试剂3和试剂4按1份： 2份： 5份： 5份的比例组成； 所述的试剂1 由以下成分组成： α ‑1,2‑ 岩藻糖苷酶1 ‑10KU， 用0.1M的磷酸盐缓冲液定容至100mL； 试剂2由以下成分组成： 乳糖酶1 ‑ 6KU， 用0.1M的磷酸盐缓冲液定容至100mL； 试剂3由以下成分组成： 辣根过氧化物酶0.2 ‑ 10KU， 葡萄糖氧化酶2 ‑12KU， 4氨基安替比林20 ‑200mg， 用0.1M的磷酸盐缓冲液定容至 100mL； 试剂4由以下成分组成： 苯酚或对 羟基苯甲酸0.2 ‑1g， 用0.1M的磷酸盐缓冲液定容至 100mL。 3.如权利要求1所述的2' ‑岩藻糖基乳糖试剂盒的制备方法， 其特征在于， 该方法包括 以下步骤： (一)制备 试剂1： 10 0mL(试剂体积)； (1)先向容器内加入80mL的0.1M的磷酸盐缓冲液； (2)加入α ‑1,2‑岩藻糖苷酶； (3)加0.1M的磷酸盐缓冲液定容至10 0mL； (二)制备 试剂2： 10 0mL(试剂体积)； (1)先向容器内加入80mL的0.1M的磷酸盐缓冲液； (2)加入乳糖酶； (3)加0.1M的磷酸盐缓冲液定容至10 0mL； (三)制备 试剂3： 10 0mL(试剂体积)； (1)先向容器内加入80mL的0.1M的磷酸盐缓冲液； (2)加入4氨基安 替比林； (3)依次加入辣 根过氧化物酶、 葡萄糖氧化酶； (4)加0.1M的磷酸盐缓冲液定容至10 0mL； (四)制备 试剂4： 10 0mL(试剂体积)； (1)先向容器内加入80mL的0.1M的磷酸盐缓冲液； (2)加入苯酚或对羟基苯甲酸； (3)加0.1M的磷酸盐缓冲液定容至10 0mL。 4.如权利要求1所述的2' ‑岩藻糖基乳糖试剂盒， 其特征还在于： 使用乳糖酶、 葡萄糖氧 化酶或辣根过氧化物酶中的一种或几种， 与岩藻糖苷酶组合。 5.根据权利要求4所述的岩藻糖苷酶， 其特征在于： 为α ‑1,2‑岩藻糖苷酶、 α 1 ‑2,3,4,6 岩藻糖苷酶 或α‑1,3‑岩藻糖苷酶以及其同工酶。 6.根据权利要求1所述的2' ‑岩藻糖基乳糖试剂盒， 其特征还在于： 使用分光光度计法 检测样品中的2' ‑岩藻糖基乳糖， 包括使用酶标仪及孔板检测的拓展。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115452740 A 2一种2′ ‑岩藻糖基乳糖的快速检测试剂盒及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物试剂， 具体涉及一种检测试剂盒， 尤其涉及一种2 ′ ‑岩藻糖基乳糖 的快速检测试剂盒及其应用。 背景技术 [0002]人乳寡糖(human  milk oligosacchari des， HMOs)是人乳中的一类不可消化的碳 水化合物， 对婴幼儿的生长发育至 关重要。 HM Os在人乳中的含量较高， 仅次于脂肪和乳糖而 位列第三大固体成分， 在正常乳中的含量为5 ‑12g/L。 而2 ′ ‑岩藻糖基乳糖(2 ′ ‑ fucosyllacto se， 2′ ‑FL)是含量最丰富的HMO， 约占HMOs总量的30％。 2 ′ ‑岩藻糖基乳糖具有 多种功能： 作为益生元调节人的肠道菌群， 缓解腹泻症状； 促进婴幼儿的神经系统发育和修 复； 促进免疫系统发育以抵抗病原菌的黏附、 调节免疫系统等。 FAD和欧盟已批准2 ′ ‑岩藻糖 基乳糖作为 新食品原料， 添加到婴幼儿奶粉、 膳 食补充剂或医疗 食品中。 [0003]目前， 2′ ‑岩藻糖基乳糖 的生产主要有三种方法， 全细胞合成法、 酶催化法以及化 学合成法。 无论是何种生产方法， 对2 ′ ‑岩藻糖基乳糖的定量环节都必不可少。 同时除生产 之外， 测量样品中的2 ′ ‑岩藻糖基乳糖含量对于其在食品医疗领域的应用以及其他临床评 价实践也具有重要意义。 现在2 ′ ‑岩藻糖基乳糖的检测方法主要包括高效液相色谱法 (High‑performance  liquid chromatography,HPLC)、 高pH阴离子交换色谱法(High  pH  anion exchange  chromatography， HPAEC)和液质联用法(Liquid  chromatography –mass  spectrometry,LC –MS)等。 上述方法具有高分辨率、 高选择性和低检测限的优点， 但也存在 着样品前 处理过程繁琐、 成本高昂等问题； 尤其在针对大量样品进 行检测的情况下， 上述检 测方法比较耗时耗力， 不能满足大规模样品及时定量的生产需求。 发明内容 [0004]针对以上问题， 本发明提供了一种2 ′ ‑岩藻糖基乳糖快速检测试剂盒。 [0005]为了实现上述目的， 本发明采用如下技 术方案： [0006]本发明提供了一种2 ′ ‑岩藻糖基乳糖快速检测 试剂盒， 试剂盒由试剂1、 试剂2、 试 剂3和试剂4， 按1份： 2份： 5份： 5份的比例组成。 [0007]试剂1(10 0mL)(试剂体积)由下列成分组成： [0008] [0009]用0.1M的磷酸盐缓冲液定容至10 0mL。 [0010]试剂2(10 0mL)(试剂体积)由下列成分组成： [0011] 说　明　书 1/8 页 3 CN 115452740 A 3