ICS 65.020.20 B 61 DB32 江 苏 省 地 方 标 准 DB32/T 3901—2020 脱毒矮化自根砧苹果苗木繁育技术规程 Technical regulation for propagation apple seedings with virus-free dwarf rootstocks 2020-10-13 发布 江苏省市场监督管理局 2020 - 11-13 实施 发 布 DB32/T 3901—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由南京农业大学提出。 本标准由江苏省园艺标准化委员会归口。 本标准起草单位：南京农业大学、江苏徐淮地区徐州农业科学研究所、江苏省大沙河现代农业综合 开发集团有限公司。 本标准主要起草人：渠慎春、赵林、张忠伟、侯应军、陈卫平、王磊彬、高志红。 I DB32/T 3901—2020 脱毒矮化自根砧苹果苗木繁育技术规程 1 范围 本标准规定了采穗圃营建、矮化砧木的选择、砧木苗培育、嫁接及定植、嫁接苗管理、嫁接苗出圃 等矮化自根砧苹果苗木繁育技术。 本标准适用于脱毒苹果矮化自根砧苗木的繁育。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 8370 苹果苗木产地检疫规程 GB 9847 苹果苗木 GB/T 12943—2007 苹果无病毒母本树和苗木检疫规程 NY/T 1085—2006 苹果苗木繁育技术规程 3 采穗圃营建 按 NY/T 1085—2006 规定执行。 4 矮化砧木的选择 矮化砧木可以选择M9T337、M9、B9等。 5 脱毒砧木苗及苹果品种苗获取 见附录A。 6 砧木苗培育 6.1 砧木组培苗移栽 经过病毒检测的脱毒组培苗进行炼苗并移栽到营养钵中，然后在设施大棚内驯化培育到30 cm高， 根颈部位粗在0.5 cm左右。按株距30 cm、行距150 cm，把以上驯化苗木移栽到田间培育。 6.2 第一年管理 6.2.1 水肥管理 1 DB32/T 3901—2020 生长季根据天气情况灌水，保持土壤相对含水量75%左右。施肥2～3次（最后一次时间为压条后）， 每次施肥量为复合肥20 kg/亩～30 kg/亩，根据长势追加适量尿素，同时补充叶面肥 (顶绿螯合铁6000 倍+优聪素700倍)。 6.2.2 除草 杂草高于5 cm时，应进行人工除草。期间可以适当增加短截促进分枝的处理，以保证后面压条的枝 条数量。 6.2.3 病虫害防治 按 NY/T 1085—2006规定执行。 6.2.4 压条 6.2.4.1 时间 10月中下旬（新梢停长后）。 6.2.4.2 方法 6.2.4.2.1 修剪 压条前剪去梢部不充实部分，同时剪去长势弱、生长方向与压条方向相反的侧枝（剪 到离侧枝的基部3 cm～5 cm处）。 6.2.4.2.2 开沟 沿砧木行两侧开宽50 cm左右（宽度须足够容纳全部压条）、深约10 cm的浅沟。 6.2.4.2.3 压条 采用顺行编织，辅以竹签别枝的办法将所有大枝错落压实，必须将全部枝条平卧在浅 沟底部。 6.2.4.2.4 覆土 压条后用细土将裸露在外的枝条覆盖。 6.3 第二年管理 6.3.1 水肥管理 在苗木高度10 cm～15 cm和覆锯末之前分两次进行追肥，每次施复合肥20 kg/亩～30 kg/亩。覆完 锯末以后，适时灌水，自根砧压条繁殖，水分是生根的关键，始终保持土壤相对含水量75%左右。 6.3.2 覆锯末 6.3.2.1 第一次覆腐熟锯末 子砧苗高度30 cm左右时开始第一次覆锯末，厚度5 cm～10 cm。 6.3.2.2 第二次覆腐熟锯末 子砧苗高度40 cm～45 cm时开始第二次覆锯末，厚度5 cm～10 cm。以后 多次覆盖，直至锯末厚度达到50 cm。 6.3.2.3 覆土 每次覆锯末后，持续灌水，待锯末湿度达到手握成团时开始覆土，覆土高度3 cm～5 cm。 6.3 出圃 秋季落叶后即可出圃，可采用机械出苗，按GB 9847分级并贮藏。 7 嫁接及定植 7.1 接穗准备 落叶后剪取脱毒优良苹果品种芽体饱满的一年生中庸枝条为接穗，沙藏或保湿冷藏。 2 DB32/T 3901—2020 7.2 嫁接时期和方法 嫁接时期为春季，方法为枝接。采用坐地嫁接或室内嫁接；砧木粗度要求0.8 cm～1.0 cm。 7.3 嫁接苗定植 将嫁接好的苗木栽植到苗圃中，栽植密度为株距30 cm、行距80 cm。 8 嫁接苗管理 8.1 成活率检查 嫁接后10天检查成活率，及时补接。 8.2 嫁接苗修剪 秋季落叶后嫁接苗剪除分枝，第二年当植株长至120 cm时定干，同时连续施用整枝灵2次，间隔1 周，促进分枝，并立支架绑缚。第一次整枝灵亩用12 ml，兑水20 kg喷雾，第二次亩用13 ml，兑水20kg～ 25kg喷雾，要喷在枝条的嫩尖和顶芽上。 8.3 肥水管理 同6.1.1。 8.4 病虫害防治 同6.1.3。 9 嫁接苗出圃 嫁接苗在苗圃中生长2年，当苗木分枝达到5个以上，嫁接口上10 cm处苗木直径达到1.5 cm以上可 以出圃。按GB 8370进行苹果苗木产地检疫，检疫合格可以出圃。 10 记录 对生产全过程进行记录，生产档案保存2年。 3 DB32/T 3901—2020 附 录 A （规范性附录） 脱毒苹果砧木苗及苹果品种苗的获得 A.1 苹果品种和砧木初代组培苗获得 A.1.1 培养基的配制 采用1/2MS培养基，培养基成分为：1/2MS + 1.0 mg/L 6-BA + 0.1 mg/L NAA + 1g/L PVP+30g/L蔗糖 +7g/L琼脂。 A.1.2 植物材料准备和灭菌接种 剪取幼苗顶部1 cm～2 cm（含生长点）茎段作为外植体进行初代培养。用75 %酒精处理45 s，然后 再用10 %过氧化氢消毒20 min后接种。 A.2 组培苗继代增殖扩繁 继代增殖扩繁培养基为MS + 0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA + 30 g/L蔗糖+7 g/L 琼脂，pH=5.8。 A.3 苹果茎尖超低温脱毒处理 A.3.1 茎尖预培养 取组培苗约2 mm左右的茎尖，接种于MS+6.0 g/L琼脂粉+0.75 mol/L蔗糖的培养基中，25℃暗培养3 d。 A.3.2 装载 取预培养过的茎尖，放入装载溶液中，装载溶液为MS+2 mol/L甘油+0.75 mol/L 蔗糖，pH=5.8。处 理温度为25 ℃，处理时间为60 min。 A.3.3 超低温处理 将装载过的茎尖转移到pH5.8的PVS-2溶液中，处理温度为0 ℃，处理时间为2 h。然后转入10 mL 冻存管中，直接投入液氮中处理1 h。 PVS-2 溶液为：MS + 30 % (W/V) 甘油+15 % (W/V) 聚乙二醇+15 % (W/V) DMSO (二甲基亚砜) +0.4 mol/L蔗糖。 A.3.4 解冻 从液氮中取出冻存管，快速转移到40℃的水浴锅中，处理2 min。然后取出茎尖放入MS+1.2 mol/L 的蔗糖溶液中20 min，直到茎尖漂浮在液体表面。 A.3.5 茎尖再生培养 将处理过的茎尖转入增殖培养基中，暗培养1周后进行光照培养。一个月后将再生株系进行继代扩 繁，增殖扩繁培养基为：MS + 0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA + 30 g/L蔗糖+6 g/L 琼脂，pH5.8。 4 DB32/T 3901—2020 A.4 再生植株的病毒检测 按GB/T 12943—2007进行苹果无病毒母本树和苗木检测，根据GenBank登录的ACLSV、ASGV、 ASPV、APMV、ASSVD等5种病毒外壳蛋白序列设计引物，结合苹果内参基因TUB特异性片段分别进 行PCR扩增验证，从而检测再生植株是否含有病毒。 A.5 扩繁、炼苗和移栽 经过病毒检测的无病毒组培苗进行扩繁、炼苗和移栽。 A.6 脱毒原种的保存 脱毒原种的保存的方式有田间原种保存圃保存和室内组培保存。 A.6.1 田间原种保存圃保存 无病毒原种树定植于有防虫保护网设备的网室内或专门的温室里，并远离有病毒潜伏来源的果园2 km以上。 A.6.2 组培保存 由组织培养方法获得的无病毒原种可以保留在瓶内继代培养。如果需用接穗，可以扩繁几代，移至 田间。 A.6.3 病毒检测 无病毒原种树每5年应进行1次病毒检测，发现问题即剔除。 ___________________________ 5