ICS_11. 220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 575--2002 牛传染性鼻气管炎诊断技术 Diagnostic techniques for infectious bovine rhinotracheitis 行业标准信息服务平台 2002-08-27 发布 2002-12-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 575—2002 前言 牛传染性鼻气管炎(infectious bovine rhinotracheitis，简称IBR）是由牛疱疹病毒1型（BHV-1)感 染家养牛和野生牛引起的一种病毒性传染病，被世界动物卫生组织[WorldOrganizationforAnimal Health（英），OfficeInternationaldesEpizooties（法），OIE列为B类疾病，我国农业部列为二类动物疫 病。该病广泛分布于世界各地，该病死亡率较低，许多感染牛呈亚临床症状经过，往往由于细菌继发感染 导致更为严重的呼吸道疾病。本标准所规定的技术与OIE推荐的相应技术一致。 本标准的附录A、附录B为规范性附录。 本标准由农业部畜牧兽医局提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：农业部动物检疫所。 本标准主要起草人：封启民、李昌琳、李晓成、李其平。 行业标准信息服务平 NY/T 575—2002 牛传染性鼻气管炎诊断技术 1范围 本标准规定了牛传染性鼻气管炎(IBR)诊断技术要求。 本标准规定的病毒分离方法适用于牛传染性鼻气管炎病毒的分离；微量血清中和试验和酶联免疫 吸附试验适用于牛群检疫、流行病学调查及牛群抗体水平的检测。 2牛传染性鼻气管炎病毒分离鉴定 2.1材料准备 2.1. 1病料的采集 2.1.1.1呼吸道拭子：用灭菌拭子伸人鼻道采取分泌物，然后放入含青霉素1000IU/mL，链霉素 1000μg/mL，pH7.2的Earles液中。也可用棉拭子刮取眼分泌物，并用相同的方法处理。 2.1.1.2阴道拭子：用棉拭子采集脓疱性外阴阴道炎早期病变的阴道黏液，放人含青霉素 1 000 IU/mL,链霉素1 000 μg/mL,pH7.2的 Earles 液中。 2.1.1.3脑组织样品：在剖检时无菌采集脑组织。 2.1.1.4流产胎儿组织样品：刚死亡的胎儿，无菌采集肺、肾、脾等各种组织样品，放入每1.0mL含有 1000IU青霉素，1000μg链霉素，pH7.2的Earles液中。 2.1.1.5精液：至少采集新鲜精液，或冷冻精液0.5mL，置液氮中保存备用。 2.1.2样品的运送 采集的样品立即放人4℃冰箱保存，在24h内送到实验室。 2.1.3样品处理 2.1.3.1收到棉拭子样品后，先经冻融两次，并充分振动，拧干棉拭子，将样品液经10000r/min离心 10min，取上清液作为组织培养的接种分离材料。 2.1.3.2组织样品先用Earles液或Hanks液（pH7.2)制成20%的匀浆悬浮液，再经10000r/min离 心10min，取上清液作为接种分离材料。 2.1.3.3精液冻融两次或超声波裂解，再经10000r/min离心10min，新鲜精液通常对细胞有毒性， 在接种前应预先作稀释处理，用Earles液作1：15稀释。 2.2操作方法 样品接种：取经处理过的样品0.2mL接种到已形成良好单层的牛肾或睾丸原代或次代细胞培养 瓶中。每份样品接种4瓶，于37℃吸附1h后，倾去接种液，用Earles液洗三次，最后加人含3%（不含 IBR抗体)的牛血清细胞维持液1 mL。置 37℃培养,逐日观察细胞病变;若7天仍不出现致细胞病变， 则收获培养物继代于新制备的细胞上，盲传三代后，观察细胞病变，出现病变者收获培养物，保存于 一70℃待鉴定。 2. 3 病毒鉴定 病毒致细胞病变特点是细胞变圆,聚合，呈葡萄串状、拉网状,最后脱落。取出现上述病变的细胞培 养物，经冻融、裂解两次后，以10000r/min离心10min，取上清再作下列试验。 1