SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3953—2014 国境口岸轮状病毒（A组）、诺如病毒、 星状病毒的多重RT-PCR检测方法 Detection of rotavirus(group A) ,norovirus and astrovirus bymultiple RT-PCR at frontier port 行业标准信息服务平台 2014-04-09发布 2014-11-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3953—2014 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国珠海出入境检验检疫局、深圳市计量质量检测研究院、中华人民 共和国云南出人境检验检疫局。 行业标准信息服务平台 SN/T 3953—2014 国境口岸轮状病毒（A组）、诺如病毒、 星状病毒的多重RT-PCR检测方法 1范围 本标准规定了国境口岸轮状病毒（A组）、诺如病毒、星状病毒多重RT-PCR检测的对象、检测方法 及结果报告。 本标准适用于国境口岸轮状病毒（A组）、诺如病毒、星状病毒的实验室检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB19489实验室生物安全通用要求 SN/T1193基因检验实验室技术要求 SN/T 1720 出入境口岸轮状病毒感染监测规程 WS/T230 临床诊断中聚合酶链反应（PCR)技术的应用 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 轮状病毒rotavirus 属于呼肠孤病毒科（Reoviridae）轮状病毒属（Rotairus），为双链RNA病毒，基因组分11个节段， 是引起人类、哺乳动物类和鸟类腹泻的主要病原体。轮状病毒有7个血清组（A～G），其中A、B、C组能 引起人和动物腹泻，以A组最常见，它是婴幼儿腹泻首要的致病原。 息服务平 3.2 诺如病毒Norovirus 诺瓦克样病毒Norwalk-likeviruses;NLV 诺沃克样病毒Norwalk-likeviruses；NLV 属于杯状病毒科（Caliciviridae）诺如病毒属（Norovirus），为单股正链RNA病毒，是引起成人和婴 幼儿急性非细菌性胃肠炎的重要病原体，全世界范围内均有流行，全年均可发生感染。诺如病毒原称为 诺瓦克样病毒或诺沃克样病毒（Norwalk-likeviruses，NLV），诺瓦克病毒（Norwalkvirus，NV）是这组 病毒的代表种，2o02年第8届国际病毒分类委员会将其正式命名为Norovirus，我国按照音译称为诺如 病毒。 3.3 星状病毒Astrovirus 属于星状病毒科（Astroviridae）哺乳类星状病毒属（Mamastrovirus），为单股正链RNA病毒，是引 起婴幼儿腹泻的重要病原体。 1 SN/T 3953—2014 3.4 逆转录聚合酶链反应reversetranscriptionpolymerasechainreaction；RT-PCR 将RNA的逆转录（RT)和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。本标准采用一步法逆 转录聚合酶链式反应(RT-PCR）。在一步法RT-PCR中,首先以RNA为模板，利用下游特异性引物， 在依赖RNA的DNA聚合酶（逆转录酶）的作用下转录合成互补DNA（cDNA），该步称作“逆转录”随 后，再以cDNA为模板，利用上游和下游特异性引物，在DNA聚合酶的作用下进行PCR循环扩增；最 终使RNA分子的某个特定区域（目的片段）被扩增达几百万倍。 3.5 相同标签辅助-无引物二聚体homo-tagassistednon-dimer；HAND 列作为通用引物扩增由特异性引物产生的PCR片段，从而能有效地抑制引物二聚体的产生，减小多重 PCR体系中各基因间扩增效率的差异，提高多重PCR的稳定性、均一性和扩增效率。HAND系统又可 译为同源加尾系统。 4缩略语 下列缩略语适用于本文件。 4.1DEPC：diethylpyrocarbonate，焦碳酸乙二酯。 4.2PAGE：polyacrylamidegelelectrophoresis，聚丙烯酰胺凝胶电泳。 4.3bp:basepair，碱基对。 5检测对象 5.1国境口岸发现的有呕吐、腹泻和发热等症状，疑似腹泻病毒感染的急性肠胃炎病人。 5.2其他申请检验的人员。 6 生物安全和PCR防污染要求 慧服务平台 实验室生物安全应符合GB19489的规定。PCR防污染措施按WS/T230和SN/T1193的规定 执行。 7主要仪器 7.1二级B型生物安全柜。 7.2 台式高速冷冻离心机（最高离心力12000g以上）。 7.3 旋涡振荡器。 7.4 冰箱：4℃、一20℃和-70℃。 超净工作台。 7.6 微型离心机。 7.7 PCR热循环仪。 7.8电子天平(d=1mg)。 7.9微波炉。 2