ICS 67.120.30 B 50 T/ZACA 团体标准 T/ZACA 021—2020 豆芽中氟喹诺酮类 和硝基咪唑类药物残留 量的测定 液相色谱 -串联质谱法 Determinationof residues of fluoroquinolones and nitroimidazoles in beansprout byliquid chromatography -tandem mass spectrometry 2020 - 01 - 13发布 2020 - 01 - 19实施 浙江省质量合格评定协会 发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/ZACA 021 —2020 I 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 原理 .............................................................................. 1 4 试剂和材料 ........................................................................ 1 5 仪器和设备 ........................................................................ 2 6 分析步骤 .......................................................................... 2 7 精密度 ............................................................................ 5 8 准确度 ............................................................................ 5 9 灵敏度 ............................................................................ 5 附录A（资料性附录） 氟喹诺酮类及硝基咪唑类药物中英文名称、CAS 号、分子式和相对分子质量 6 附录B（资料性附录） 氟喹诺酮类及硝基咪唑类药物混合标准溶液选择离子流图 (20 μg/kg) ... 7 全国团体标准信息平台 T/ZACA 021 —2020 II 前 言 本标准依据 GB/T 1.1— 2009规定 的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由浙江省质量合格评定协会提出并归口。 本标准主要起草单位：绿城农科检测技术有限公司 、浙江省疾病预防控制中心 。 本标准参与起草单位： 浙江省农业科学院农产品质量标准研究所 、湖州市农畜水产品检测中心、 丽 水蓝城农科检测技术有限公司。 本标准主要起草人： 余鹏飞、何晓明、章舒祺 、徐小民、杨鲁琼、洪琳、倪娟桢、田佩琪、朱萌 萌、周婷婷、郭利攀、 徐杰、沈东强、 卢军、沈雄雅、陈志民、朱丽婷。 本标准为首次发布。 全国团体标准信息平台 T/ZACA 021 —2020 1 豆芽中氟喹诺酮类和硝基咪唑类药物残留量的测定 液相色谱 -串联质谱法 1 范围 本标准规定了豆芽中 恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、沙拉沙星、达氟沙星、 洛美沙星、甲硝唑、二甲硝咪唑、异丙硝唑、洛硝哒唑含量的液相色谱-串联质谱 测定方法。 本标准适用于豆芽中 恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、沙拉沙星、达氟沙星、 洛美沙星、甲硝唑、二甲硝咪唑、异丙硝唑、洛硝哒唑含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样用1%乙酸乙腈提取，经 均质提取、浓缩、正己烷净化、离心后，用液相色谱- 串联质谱仪测定， 用基质外标法定量。 4 试剂和材料 除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 试剂 4.1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。 4.1.2 乙腈（CH3CN）：分析纯。 4.1.3 冰乙酸（CH 3COOH）：分析纯。 4.1.4 氯化钠（NaCl ）：分析纯。 4.1.5 甲醇（CH3OH）：色谱纯。 4.1.6 甲酸（HCOOH）：色谱纯。 4.1.7 甲酸铵（HCOONH 4）：色谱纯 。 4.1.8 正己烷（C 6H14）：色谱纯 4.2 试剂配制 4.2.1 1%乙酸乙腈： 移取5 mL冰乙酸（ 4.1.3）和495 mL乙腈（4.1.2）混合。 4.2.2 复溶液（0.1%甲酸 -30%乙腈水溶液）： 300 mL乙腈（4.1.1）、1 mL甲酸和699 mL水混合。 4.2.3 0.1%甲酸 -2 mmol甲酸铵水溶液 ：称取0.126 g甲酸铵，加入0.1%甲酸溶液定容至 1 L。 全国团体标准信息平台 T/ZACA 021 —2020 2 4.2.4 0.1%甲酸 乙腈：移取 1 mL甲酸和999 mL混合。 4.2.5 乙腈饱和正己烷：移取 200 mL正己烷(4.1.8) 于250 mL分液漏斗中， 加入少量乙腈，剧烈振摇 数分钟，静止 分层，弃 去下层乙腈层即得。 4.3 标准品 氟喹诺酮类、硝基咪唑 类标准物质：纯度均≥ 90%（详见附录 A） 4.4 标准溶液配制 4.4.1 标准储备溶液 准确称取适量的氟喹诺酮和硝基咪唑类各 标准物质（ 4.3）于 25 mL容量瓶中，用甲醇配制成 100 mg/L的储备液，- 18℃以下 避光保存，有效期为 6个月。 4.4.2 标准中间液 准确移取一定体积的每种标准储备液（4.4.1 ）分别放入 10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度 ，配 制成10.0 µg/mL的标准中间液 ，混合均匀，转移至储液瓶中， -18℃以下避光保存，有效期为 3个月。 4.4.3 混合标准工作液 分别准确移取 每种1.00 mL标准中间液 （4.4.2）于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度 ，混合均 匀，转移至储液瓶中，配制成 1.00 µg/mL的混合标准工作液， 4℃以下避光保存，有效期为 7天。 4.4.4 标准工作曲线 移取一定体积的 混合标准工作液 （4.4.3） 用空白基质液分别配制成含 4.00 μg/L、10.0 μg/L 、25.0 μg/L 、 100 μg/L、250 μg/L、500 μg /L的8种氟喹诺酮类和 4种硝基咪唑类 标准工作溶液 ， 浓度由低到高进样检测， 以定量子离子的 峰面积为纵坐标，对应浓度为横坐标， 采用直线拟合的方式绘制标准工作曲线 。实际检 测中，经验证后可适当调整标准曲线的浓度范围。 注：空白基质的制备和处理过程同6.1 、6.2。 5 仪器和设备 5.1 液相色谱- 串联质谱仪，配有电喷雾（ ESI）离子源。 5.2 高速组织捣碎机。 5.3 分析天平， 感量0.01 g和0.00001 g。 5.4 氮吹仪。 5.5 涡旋混匀器（2500 r/min ）。 5.6 离心机：转速≥ 12000 r/min。 5.7 超声波提取仪。 5.8 10 mL试管。 5.9 离心管：50 mL。 5.10 容量瓶：25 mL。 5.11 尼龙膜：0.22 μ m。 6 分析步骤 全国团体标准信息平台 T/ZACA 021 —2020 3 6.1 样品制备 取代表性豆芽样品约500 g ，将其切碎后（不可用水洗）， 经高速组织 捣碎机均匀捣碎 ，均分成两 份，装入洁净容器内，密封，-18 ℃以下保存。 6.2 样品处理 称取 5 g（精确至 0.01 g）试样，于50 mL离心管中，加入 5 mL水和 10 mL 1%乙酸乙腈（ 4.2.1） 均质 1 min，超声提取 20 min，加入 5 g氯化钠（4.1.4）涡旋 1 min，12000 r/min 离心 3 min，上层有机 相转移到 25 mL容量瓶中 ，残渣再用 10 mL1% 乙酸乙腈（ 4.2.1）重复提取一次，合并两次提取液， 用 1%乙酸乙腈（ 4.2.1）定容到 25 mL，混合均匀，准确移取 10.0 mL提取液于 10 mL试管中，40 ℃氮吹 至近干。加入 1 mL复溶液（4.2.2 ），超声 3 min、涡旋 3 min，溶解残渣，