ICS 65.020.20
B 05
团体标 准
T/FSSJ SYNY001—2020
代替T/FSSJ SYNY001 -2017
黑木耳液体菌种生产技术规程
Production Technical Practice for Liquid Spawn of Auric ularia auricula
2020 - 01 - 20发布 2020 - 01 - 20实施
辽宁省食用菌协会 发布
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T/FSSJ SYNY001—2020
I 前 言
本标准按照 GB/T 1.1 -2009《标准化工作导则 第1部分:标准的结构和编写》给出的规则起草。
本标准由辽宁省食用菌协会提出。
本标准由辽宁省食用菌协会 归口。
本标准起草单位: 辽宁三友农业生物科技有限公司、 辽宁省微生物科学研究院、 辽宁省食用菌协会。
本标准主要起草人:邹存兵、赵铠、朱巍巍、张忠伟、陈飞、黄云松、李莹莹、孙凯、 刘东旭、刘
芳岑、盛金、王俊超。
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1 黑木耳液体菌种生产技术规程
1 范围
本标准规定了黑木耳液体菌种生产的基本要求,主要包括生产场地、厂房和布局、设施设备、生产
工艺流程、质量要求、技术要求、生产记录与存档、菌种贮藏。
本标准适用于黑木耳液体菌种的生产。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版 本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB 19169 黑木耳菌 种
GB/T 12728 食用菌术语
GB/T 150.4 压力容器 第4部分:制造、检验和验收
NY/T 1742 食用菌菌种通用技术要求
NY/T 1731 食用菌菌种良好作业规范
NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程
NY/T 1846 食用菌菌种检验规程
3 术语和定义
GB/T 12728 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。
3.1
发酵罐 fermentation bior eactor
进行发酵培养的专用设备,也称发酵反应器。
3.2
罐压 pressure of fermentation bioreactor
指液体菌种培养过程中培养器内保持的空气压力,单位: Mpa。
3.3
通风量 ventilation volume
液体菌种培养时每分钟通入培养基中的无菌空气的量。用 V/V(培养基体积 /通入空气体积)标示。
3.4
接种量 inoculation quantity
接入培养器中的菌种的数量,以菌种体积与培养基体积的百分比标示。
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2 3.5
摇瓶液体种 flask culture
装在玻璃三角瓶内于 摇床上恒温振荡培养的液体菌种。
3.6
初始pH值 initial pH
液体培养基配制灭菌后未接种时的 pH值。
4 人员
应有与液体菌种生产所需的专业技术人员,包括检验人员 。
5 场地和设施
5.1 生产场地、厂房和 布局
通风良好,交通便利。周围无工矿企业污染源、生活垃圾堆放和填埋场、工业固体废弃物和危险废
弃物堆放和填埋场等。
布局符合 符合NY/T 528 规定。
5.2 生产设施与设备
根据生产需求进行配备, 使用符合NY/T 1731设备管理 规定。压力容器应符合 GB/T 150.4 规定并经
政府有关部门检验合格。
6 生产工艺流程
母种→摇瓶液体种
↓
培养料配制→ 投料→灭菌→冷却→接种→培养→ 发酵罐液体种
7 培养基
母种培养基使用附录 A中A.1规定的马铃薯葡萄糖琼脂培养基( PDA)或A.2规定的综合马铃薯葡萄糖
琼脂培养基( CPDA)。
液体种培养基根据 黑木耳品种及当地原料的要求使用适宜配方(见附录 B),严格掌握初始 pH。
8 母种
母种继代培养后须按 NY/T 1846 规定抽样,并进行感官检验和菌丝微观特征检验,合格菌种进入生
产流程。母种质量要求符合 GB 19169 及NY/T 1742 关于母种 质量的规定。
9 摇瓶液体 菌种生产
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3 9.1 培养基分装及灭菌
摇瓶液体种培养基装量 为容器体积的 1/4至1/3, 分装后立即灭菌。 按常规高压蒸汽灭菌锅操作规程,
0.1Mpa~0.12Mpa(121℃~126℃),维持 25min。
灭菌后的摇瓶液体种培养基于 30℃±1℃ 培养箱恒温培养 48小时后,观察确认无混浊、无异味,可
用于接种 培养。
9.2 接种
按无菌操作 规程,将母种斜面菌丝体切割成 2mm~4mm颗粒,移入摇瓶培养基中,每 100 mL液体培养
基接种菌丝体颗粒 1颗~3颗。
9.3 培养
菌种培养温度 26℃±1℃,空气相对湿度 55%~65%,避光振荡培养。往复式摇床振荡频率 60次~120
次/分, 旋转式摇床振荡频率 150转~180转/分。每日检查生长状态,及时检出浑浊、异味、泡沫异常
的不合格菌种。
摇瓶静置 1分钟后,菌丝球体积占比液体培养基体积的 4/5以上,可结束培养。
10 发酵罐液体菌种生产
10.1 空气过滤系统检查
使用前要拆分检查滤芯,要求无油污、料污、无破损,外壳内外壁要求无污物、光亮洁净。
滤芯在额定风量下,对粒径 0.1~0.2μm粒子的过滤效率大于 99.99%,空气阻力低于 280pa。
10.2 发酵罐检查与清洗
检查罐上全部阀门、安全阀、压力表、要求完好,工作正常。对罐体内、外和全部阀门用流水进行
冲洗,达到无死角、内壁无任何培养料残余物的洁净程度。
10.3 空消灭菌
发酵罐初次使用、出现染菌、长期放置 及更换品种时, 应进行空消灭菌。有内置电加热棒的培养器
加水至容积的 80%加热至121℃,维持 40min。用外源蒸汽灭菌的培养器,蒸汽压力达到 0.1Mpa~0.12Mpa
(121℃~124℃),维持 40min。
10.4 投料定容
将配制好的培养基材料搅拌均匀,倒入或用泵抽入发酵罐中,加水定容至所需体积。培养基投料总
量为罐体总 容积的70%~80%。
10.5 灭菌和冷却
按高压蒸汽灭菌方法操作,培养器内压力达到 0.1Mpa~0.12Mpa,培养基温度达到 121℃~124℃、
保持时间 60 min~90 min。
灭菌结束将培养基降温至 24℃~28℃。 降温过程中要及时向培养器内补充过滤空气, 防止罐压回零。
10.6 接种
利用火焰保护接种,接种量为罐内培养基总量的 0.1%~0.5%。
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4 10.7 培养
发酵罐通风量每分钟 1:0.5~1.2 V/V(料液体积/空气体积 ),调节罐压保持在 0.02 Mpa ~0.04
Mpa,培养温度调节在 24℃~26℃,培养7d~10d可达到香菇液体菌种成品标准。特殊品种根据特殊需求
具体设定。
10.8 检测和判定
培养开始3d后每日从发酵罐中取出样品进行检测。 按照NY/T 1846 中菌丝微观特征、细菌霉菌检验
方法检验,如异常则排空罐内培养物,空消,重新生产。
发酵终 pH 4.5-5.5,每100ml液体菌种菌丝干离心后重量 2.0~2.8g/100ml。合格黑木耳液体菌种
球状菌丝体呈白色,滤液呈淡黄色。菌液稍粘稠,有大量球状菌丝体悬浮、分布均匀、菌球浓白清晰,
有黑木耳液体菌种培养时特有的香气,无异味。
10.9 贮藏
成品液体菌种 应及时应用 。
特殊情况下 ,培养结束后在发酵罐 内通入无菌空气,保持罐压 0.02Mpa~0.04Mpa,环境温度 6℃~
10℃,可保存24h。
11 记录与存档
灭菌、培养 、检测环节应有记录,由具体操作人员现场填写,定期审核,签字后归档保存。
12 标签、包装、运输、贮存
符合NY/T528关于标签标志、包装运输 、贮存条件 的要求。
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5 A A
附 录 A
(规范性附录)
母种常用培养基及配方
A.1 PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)
马铃薯200g(用浸出汁),葡萄糖 20g,琼脂20g,水1000 ML,pH6.5~7.0。
A.2 CPDA 培养基(综合马铃 薯葡萄糖琼脂培养基)
马铃薯200g(用浸出汁) , 葡萄糖 20g, 磷酸二氢钾 2g,硫酸镁0.5g,VB1 100mg ,水1000 ML,pH6.5~
7.0。
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6 B B
附 录 B
(规范性附录)
黑木耳液体种常用培养基及配方
B.1 马铃薯葡萄糖培养基
马铃薯全粉 400g(100目) ,葡萄糖 2000g,磷酸二氢钾 100g,硫酸镁 50
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