ICS67.050 CCSX04T/ZNZ 浙江省农产品质量安全学会团体标准 T/ZNZ127—2022 植物源农产品中色氨酸的测定 Determinationoftryptophaninagriculturalproductsofplantorigin 2022-09-15发布 2022-10-15实施 浙江省农产品质量安全学会发布 全国团体标准信息平台 T/ZNZ127—2022 I前  言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由浙江省农产品质量安全学会提出并归口。 本文件起草单位：浙江省农业科学院农产品质量安全与营养研究所。 本文件主要起草人：张玉、王伟、白丽萍、李雪、王君虹、孙素玲。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ127—2022 1植物源农产品中色氨酸的测定 1范围 本文件规定了植物源农产品中色氨酸的测定方法。 本文件适用于粮食作物中大豆、稻米、玉米、麦粉和食用菌中香菇、木耳、金针菇、杏鲍菇等植物 源农产品中色氨酸的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T12806实验室玻璃仪器单标线容量瓶 NY/T3304农产品检测样品管理技术规范 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4原理 试样中的的蛋白质经碱水解，生成游离色氨酸，经高效液相色谱分离后，用紫外检测器280nm测定， 以色谱峰保留时间定性，外标法定量。 5试剂与材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂，水为GB/T6682规定的一级水。 5.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。 5.2浓盐酸（HCl）：浓度≥37%。 5.3氢氧化钠（NaOH）。 5.4氯化亚锡（SnCl2）。 5.5乙酸钠（C4H7NaO4）。 5.6石油醚：沸程60℃~90℃。 5.7盐酸溶液（6moL/L）：吸取50mL浓盐酸，用水定容至100mL。 5.8乙酸钠缓冲液（0.05moL/L）：称取46.80g三水乙酸钠，加900mL水溶解，用冰乙酸调pH为 4.0~5.0之间，加水定容至1000mL。经0.45μm微孔滤膜过滤后使用。 5.9氢氧化钠水解液：称取25.0g氢氧化钠，6.0g二水氯化亚锡，用水溶解，并定容至100mL。 5.10L-色氨酸标准品（CAS：73-22-3）：纯度≥99%。 5.11L-色氨酸标准储备液（1.0mg/mL）：准确称取色氨酸标准品25mg（精确至0.1mg）于25mL 棕色容量瓶，加水使其溶解，并定容至刻度，于4℃冰箱保存，有效期1个月。 5.12微孔滤膜：0.45µm，水系。 6仪器与设备 6.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ127—2022 26.2分析天平：感量0.1mg。 6.3样品粉碎设备：组织捣碎机、高速粉碎机。 6.4电热鼓风恒温箱：控温范围20℃～200℃。 6.5聚四氟乙烯水解管：10mL，配密封盖。 6.6单标线容量瓶：25mL，符合GB/T12806的技术要求。 6.7机械往复式振荡器。 6.8水浴锅。 7样品制备 按NY/T3304的规定对样品进行缩分后，新鲜样品用组织捣碎机匀浆后放入聚乙烯瓶中，存放于 -18℃；干制样品粉碎后过80目筛，放入聚乙烯瓶或袋中，存放于4℃。 8试验步骤 8.1样品提取 称取干样0.05g，鲜样0.2g（精确至0.1mg）于聚四氟乙烯水解管中（大豆样品先加5mL石油醚震荡 提取30min，离心后去除上清液，沉淀水浴蒸干）。于水解管中加氢氧化钠水解液（5.9）2mL，摇匀， 充氮2min，盖紧瓶盖，置于110℃±2℃烘箱中水解18h~20h。将水解后的样品取出，冷却至室温， 用水将水解液全部转移入25mL容量瓶中，用6mol/L盐酸（5.7）调至中性，并用水定容至刻度，过滤。 滤液过微孔滤膜后测定。 8.2色氨酸标准工作液 取色氨酸标准储备液0.05mL～0.25mL（使处理后标准工作液浓度与样品溶液中色氨酸浓度相近） 置于聚四氟乙烯水解管，加氢氧化钠水解液（5.9）2mL，后续步骤与8.1同。 8.3色谱参考条件 色谱柱：C18柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒度5µm；或性能相当的C18色谱柱。 流动相：乙酸钠缓冲液+甲醇=70+30 流速：1.0mL/min。 检测波长：280nm。 进样量：20µL。 柱温：室温。 8.4测定 将处理后的色氨酸标准工作液（8.2）和提取液（8.1）分别注入高效液相色谱中，测定相应的峰面 积，通过保留时间定性，外标法定量。如果样液中色氨酸浓度与标准工作液相差较大时，调整样液浓度 后再行测定。色谱图参见附录A。 8.5空白实验 除不加试样外，采用完全相同的实验步骤进行测定。 9试验数据处理 试样中色氨酸含量（ω）以毫克每一百克（mg/100g）表示，按式（1）计算： 全国团体标准信息平台 T/ZNZ127—2022 31000100 mAF VC As ........................................（1） 式中： ω——样品中色氨酸含量，单位为毫克每一百克（mg/100g）； V——试样最终定容体积，单位为毫升（mL）； A——色氨酸标准工作液对应的峰面积； As——试样溶液对应的峰面积； C——标准工作液浓度，单位为微克每毫升（µg/mL）； m——样品质量，单位为克（g）； F——样品稀释倍数。 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定值的算术平均值表示，结果表示到三位有效数字。 10精密度 在在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一被测对象 相互独立进行测试，获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算数平均值的10%。 11其他 鲜样中色氨酸的检出限为1.0mg/100g；干样中色氨酸的检出限为4.0mg/100g。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ127—2022 4AA 附录A （资料性） 色氨酸标准溶液和样品中色氨酸色谱图 色氨酸标准溶液和样品中色氨酸色谱图见图A.1~图A.9。 图A.1色氨酸标准溶液色谱图 图A.2大豆样品色谱图 图A.3稻米样品色谱图 图A.4玉米样品色谱图 图A.5香菇样品色谱图 图A.6木耳样品色谱图 全国团体标准信息平台 T/ZNZ127—2022 5图A.7金针菇样品色谱图 图A.8麦粉样品色谱图 图A.9杏鲍菇样品色谱图 _________________________________ 全国团体标准信息平台