ICS 67.120.30 CCS B 50 T/ZNZ 浙 江 省 农 产 品 质 量 安 全 学 会 团 体 标 准 T /ZNZ 056—2021 水产品中 39种农药残留量的测定 液相色 谱-串联质谱法 Determination of 39 pesticides residues in aquatic product by liquid chromatography -tandem mass s pectrometric method 2021 - 04 - 22发布 2021 - 05 - 22实施 浙江省农产品质量安全学会 发布 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 056—2021 I 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》 的规定起 草。 请注意本文件的某些内容有可能涉及专利。本文件的发布 机构不承担识别 专利的责任。 本文件由浙江省农产品质量安全学会 提出并归口。 本文件起草单位： 绿城农科检测技术有限公司、 蓝城检测技术（上海）有限公司 、浙江省农业科 学院、浙江省水产质量检测中心、 岛津企业管理（中国）有限公司、湖州市农畜水产品检测中心 。 本文件主要起草人：何晓明、杨鲁琼、章舒祺、余鹏飞、黄福勇、徐杰、洪琳、郭 利攀、缪亚飞、 赵月钧、朱凝瑜 、朱萌萌、沈东强、刘标、武肖、 朱晓霞、田平 。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 056—2021 1 水产品中 39种农药残留量的测定 液相色谱 -串联质谱法 1 范围 本文件规定了水产品中 39种农药及相关 化学品残留量的液相色谱 -串联质谱测定方法。 本文件适用于鱼类、虾类、 蟹类、鳖类等水产品中 39种农药及相关 化学品残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件 中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样用乙腈提取，盐析离心， QuEChERS 净化，液相色谱 -串联质谱法测定，外标法定量。 5 试剂和材料 5.1 试剂 5.1.1 乙腈（C2H3N）：色谱纯。 5.1.2 甲酸（CH2O2）：色谱纯。 5.1.3 正己烷（C6H14）：色谱纯。 5.1.4 无水硫酸 镁（MgSO 4）：650 ℃灼烧4 h，置于干燥器内备用。 5.1.5 氯化钠（NaCl）：500 ℃灼烧4 h，置于干燥器内备用。 5.1.6 N-丙基乙二胺吸附剂（ PSA）：粒径范围 40 μm~60 μm，平均孔径 100 Å。 5.1.7 十八烷基键合硅胶吸附剂（ C18）：粒径范围 40 μm~60 μm，平均孔径 60 Å 。 5.1.8 微孔滤膜： 0.22 μm，有机膜。 注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 5.2 试剂配制 5.2.1 0.1%甲酸水溶液：量取1 mL甲酸（5.1.2）于1 000 mL 容量瓶中，用 水定容至刻度，混匀。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 056—2021 2 5.2.2 0.1%甲酸乙腈溶液：量取 1 mL甲酸（5.1.2）于1 000 mL 容量瓶中，用 乙腈（5.1.1）定容至 刻度，混匀 。 5.2.3 QuEChERS 吸附剂：准确称取 100 mg PSA （5.1.6）、100 mg C 18（5.1.7）和300 mg无水硫酸 镁 （5.1.4），储存于 15 mL具螺旋盖聚 丙烯离心管中，旋紧盖塞，置于干燥器内备用。 5.2.4 定容液：量取30 mL乙腈（5.1.1）于100 mL容量瓶中，用 水定容至刻度，混匀。 5.2.5 乙腈饱和正己烷：取 200 mL正己烷（5.1.3）于250 mL分液漏斗中，加入适量乙腈后，剧烈振 摇，待分配平衡后，弃去乙腈层即得 。 5.3 标准品 39种农药的中文名称、英文名称、 CAS号、分子式、相对分子量见附录 A，纯度应≥95%。 5.4 标准溶液配制 5.4.1 标准储备溶液：分别准确称取标准品（ 5.3）100.0 mg （精确至 0.0001 g ），用甲醇溶解并 定 容至100 mL，此溶液浓度均为 1 mg/mL。4 ℃避光密封保存，有效期 6个月。 5.4.2 混合标准中间溶液：取 1.00 mL标准储备溶液（ 5.4.1）用甲醇定容至 100 mL，配制成 10 µg/mL 的混合标准中间溶液， 4 ℃避光密封保存，有效期 1个月。 5.4.3 空白基质溶液：称取空白试样，按照 7.2规定的样品预处理方法操作制备。 5.4.4 基质混合标准溶液：用空白基质溶液（ 5.4.3）将混合标准中间溶液（ 5.4.2）稀释成适合浓度 的基质混合标准溶液，现配现用。 6 仪器和设备 6.1 液相色谱 -串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ ESI）。 6.2 分析天平：感量 0.1 mg和0.0001 g。 6.3 离心机： 转速不低于 8 000 r/min ，控温范围为 0 ℃至室温。 6.4 涡旋振荡器。 6.5 超声波清洗器。 7 分析步骤 7.1 试样制备 与保存 将抽取的样品充分搅碎和混匀。用四分法缩分出 1 kg，均分为 2份，分别装入洁净容器内，作为试 样。密封并标明标记。将试样于 -18 ℃以下冷冻保存。在抽样和制样的操作过程中， 应防止样品受到污 染或发生残留物含量的变化。 7.2 试样前处理 7.2.1 提取 取试样，常温自然解冻后，称取 5 g试样（精确至 0.01g）于 50 mL离心管中， 加入 10 mL水， 5 g 氯化钠（5.1.5），涡旋混匀 1 min后，准确加入 10.0 mL乙腈（5.1.1），混匀 1 min，超声提取 20 min，4 ℃ 下8 000 r/min 离心 5 min。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 056—2021 3 7.2.2 净化和浓缩 准确量取 8.00 mL提取液置于 装有 QuEChERS 吸附剂（5.2.3）的离心管 中，涡旋混匀 3 min，4 ℃下8 000 r/ min离心 3 min。静置 5 min后，取4.00 mL上清液氮吹至近干，精密加入 1.00 mL定容液（5.2.4）溶 解残余物 ，加1 mL乙腈饱和正己烷 （5.2.5），转至 10 mL离心管中， 涡旋混匀 10 s，以 8 000 r/min 离心 3 min，取下清液 过0.22 μm微孔滤膜（ 5.1.8），供液相色谱 -串联质谱联用仪分析 。 7.3 测定 7.3.1 色谱参考条件 色谱各参数应符合下列 条件： a) 色谱柱： WATERS ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm ×100 mm, 1.7 μm），或性能相当者 ； b) 流动相： A：0.1%甲酸水溶液（5.2.1），B：0.1%甲酸乙腈溶液（5.2.2）； c) 柱温：40 ℃； d) 流速：0.25 mL/min ； e) 进样量： 2 µL； f) 梯度洗脱程序见 表1。 表 1 梯度洗脱程序 时间（ min） 流动相 A（%） 流动相 B（%） 0.0 70 30 1.0 70 30 3.0 50 50 4.5 5 95 7.0 5 95 8.0 70 30 7.3.2 质谱参考条件 质谱各参数应符合下列条件： a) 离子源：电喷雾离子源（ ESI）； b) 扫描方式：正 、负离子扫描 ； c) 离子源温度： 400 ℃； d) 干燥气： 10.0 L/min ； e) 雾化气： 3.0 L/min ； f) 毛细管电压： 4000 V； g) 加热气流量： 10.0 L/min ； h) 检测方式：多反应监测（ MRM）； i) 定性离子对和定量离子对等详细仪器条件见 附录B。 7.3.3 液相色谱-质谱测定 取试样溶液和相应浓度的 基质混合标准溶液（ 5.4.4），作单点或多点校准，按外标法以峰面积计算。 标准溶液和试样溶液中 待测物质 的响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述条件下，标准溶液色谱 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 056—2021 4 图见附录 C。 7.4 空白试验 除不加试样外，均按上述操作 步骤进行。 8 结果计算和表述 8.1 定性标准 在相同试验条件下，试样中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在 ± 2.5 %之内； 且试样中定性、定量离子的相对丰度比与浓度接近的标准溶液中对应的定性、定量离子的相对丰度比进 行比较，若偏差不超过表 2规定的范围，可判定为 试样中含有对应的待测物质。 表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对丰度（ %） ＞50 ＞20~50 ＞10~20 ≤10 允许偏差（ %） ± 20 ± 25 ± 30 ± 50 8.2 定量测定 采用标准曲线法定