ICS07.080 CCSC04 团 体 标 准 T/WEBIO0001—2023 人源原代细胞制备及质量控制规范 Specificationofhumanprimarycellpreparationandqualitycontrol 2023-11-10发布 2023-11-13实施 武汉东湖国家自主创新示范区生物医药行业协会  发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/WEBIO0001—2023 I目次 前 言...........................................................................................................................................................II 1范围.....................................................................................................................................................................1 2规范性引用文件.................................................................................................................................................1 3术语和定义.........................................................................................................................................................1 4缩略语.................................................................................................................................................................1 5原代细胞制备.....................................................................................................................................................2 6质量控制.............................................................................................................................................................3 附录A（资料性）捐赠者基本信息表...................................................................................................6 附录B（资料性）样本信息表...............................................................................................................7 附录C（资料性）肿瘤细胞标记物检测流程.......................................................................................8 参考文献.....................................................................................................................................................9 全国团体标准信息平台 T/WEBIO0001—2023 II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由武汉大学提出。 本文件由武汉东湖国家自主创新示范区生物医药行业协会归口。 本文件起草单位：武汉大学、中国典型培养物保藏中心、武汉赛尔朗灵科技有限公司、中国医学科 学院基础医学研究所、天津医科大学肿瘤医院肿瘤生物样本库、浙江省肿瘤医院生物样本库、华中科技 大学同济医学院附属同济医院、华中科技大学同济医学院附属协和医院、华中科技大学协和东西湖医院、 湖南省肿瘤医院、复旦大学附属华山医院、中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院、武汉市标准化 研究院。 本文件主要起草人：沈超、杨媚媚、何静、夏司璇、王昱东、熊君、廖聪、李南、刘玉琴、李继新、 刘红亚、王前进、刘霞、李海欣、郑智国、胡志全、杨春光、姜晓兵、章小平、李俊俊、袁海涛、何正 文、陈向军、李飞、黄勇、任雯菁。 全国团体标准信息平台 T/WEBIO0001—2023 1人源原代细胞制备及质量控制规范 1范围 本文件规定了科研用人源原代细胞的制备过程中的样本获取、细胞培养及质量检测的操作程序和一 般原则。 本文件适用于人源原代细胞的相关研究。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T37864-2019生物样本库质量和能力通用要求 GB/T38736-2020人类生物样本保藏伦理要求 GB/T39767-2021人类生物样本管理规范 GB/T40352.1-2021人类组织样本采集与处理 ASN-0002-2021人源细胞系鉴定之短片段重复序列（STR）检测的标准操作（HumanCellLine AuthenticationStandardizationofShortTandemRepeat（STR）Profiling） 《中华人民共和国药典》2020年版，第三部 国卫科教发〔2023〕4号涉及人的生命科学和医学研究伦理审查办法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 细胞cell 生物体的基本单位，由膜包围的含有细胞核的原生质组成。 3.2 原代细胞primarycell 直接从组织中分离培养的细胞，传代次数不超过10代。 3.3 有限细胞系finitecellline 细胞在体外传代具有一定的期限，到达一定代次后就会衰老死亡，这种细胞系称之为有限细胞系。 3.4 无限细胞系infinitecellline 体外培养具有持续增殖能力的细胞系，称为无限细胞系。 3.5 细胞株cellstrain 通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞 株。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。 3.6 完全培养基completemedium 基础培养基添加血清、抗生素等物质后，叫完全培养基，也叫（血清）细胞培养基。 4缩略语 全国团体标准信息平台 T/WEBIO0001—2023 2下列缩略语适用于本文件。 DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid） PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction） STR：短片段重复序列（ShortTandemRepeat） PBS：磷酸盐缓冲溶液（PhosphateBufferSaline） HRP：辣根过氧化物酶（HorseradishPeroxidase） EDTA：乙二胺四乙酸（EthyleneDiamineTetraaceticAcid） 5原代细胞制备 5.1组织样本收集与运输 5.1.1组织样本的收集、处理应遵循《涉及人的生命科学和医学研究伦理审查办法》和GB/T 40352.1-2021的规定。 5.1.2组织样本的保藏应遵循GB/T38736-2020和GB/T39767-2021的规定。 5.1.3组织样本采集前应通过伦理委员会审批，具备捐赠者或代理人签署的《知情同意书》。 5.1.4专人负责组织样本的收集，所取组织放入含有组织保存液的取样管中，在管壁上标记取样信息， 并记录其他必要信息，包括但不限于捐赠者编号、性别、年龄、疾病名称、取材部位病理诊断等，具体 表格可参见附录A、附录B，以备后续查询。 5.1.5用生物样本专用运输箱及时将组织样本送往实验室，取适量组织用于细胞分离，剩余组织冻存， 用于二次细胞分离和相关鉴定。冻存组织时应采用合适的组织冻存液，以长时间维持组织活性。 5.1.6离体组织的临时保存和运输时间应不超过24h，温度2℃～8℃，细胞分离培养需在满足条件 的细胞实验室中进行。 5.2细胞分离 5.2.1组织块法 5.2.1.1充分去除血块、坏死组织等组织后，用4℃平衡盐溶液清洗。 5.2.1.2将组织切成1mm3～2mm3大小。 5.2.1.3转移至细胞培养瓶中，加入完全培养基培养，于37℃，5%浓度二氧化碳培养箱中静置72h。 5.2.1.472h